张桐栋
摘 要：随着生活水平的提高，人们越来越关注生活中所食用生物产品的营养价值。脂肪酸作为油脂的主要成分，具有很多特殊的生理功能。本文着重比较了不同脂肪酸衍生化方法对多种油脂中脂肪酸组分的定性定量分析结果，同时提供了一种可用于微量油脂检测的脂肪酸分析方法，以期为相关领域的研究和检验人员提供参考和借鉴。
关键词：油脂;鱼油;植物油;脂肪酸;气相色谱-氢火焰离子化检测器
Abstract：With the improvement of living standards， people are paying heavy attention to the nutritional value of biological products. Fatty acids as the main component of oils and fats， have some special physiological functions. The objective of this article is focusing on comparing the qualitative and quantitative analysis results of different fatty acid derivatization methods for fatty acid components in various oils. This work may provides a fatty acid analysis method that can be used for trace oils and fats; in addition， it provides new ideas for related researchers.
Key words：Oil; Fish oil; Vegetable oil; Fatty acids; GC-FID
中图分类号：R151.4+1
脂肪酸在人体中具有重要的生理功能，不同油脂的脂肪酸组成具有较大差异。医学研究证实，适量摄入多不饱和脂肪酸（PUFA），特别是n-3 PUFA，如二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA），有助于降低冠心病、动脉硬化、癌症、糖尿病、高血压、抑郁及其他一系列疾病的发生率[1-3]。目前，市售的n-3 PUFA主要来自鱼油、藻油等海洋生物油脂。常见的其他种类食用油脂，如玉米油、橄榄油，一般也含有特别的脂肪酸组分。
油脂中的脂肪酸组成和含量一般使用气相色谱（GC）进行分析检测，为提高GC检测灵敏度，通常将油脂进行前处理，即把脂肪酸衍生为酰基酯（一般为甲酯）。目前，应用最广的脂肪酸衍生化方法主要是H2SO4催化法和BF3催化法，可以有效甲酯化几乎所有的脂质，如甘油酯、游离脂肪酸。但是这类脂肪酸衍生化方法一般需要利用较多的原料油脂，才能进行准确的甲酯化分析，不能满足某些实验室对油脂进行微量分析的需要。此外，不同衍生化方法对于不同油脂中脂肪酸的分析效果也具有一定差异，需进行比较研究。本文在总结前人相关工作的基础上，提供一种油脂中脂肪酸的微量测定方法，并利用不同衍生化方法对多种食用油脂中脂肪酸组成进行对比分析，以期为国内相关领域的研究提供参考。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
仪器。配备自动进样器的Agilent 7890B气相色谱仪（FID检测器），采用60 mFFAP色谱柱，购自兰州中科安泰分析科技有限公司。
试剂。10 mg·mL-1脂肪酸甲酯混标，购自Sigma公司;正己烷、甲醇等分析纯有机溶剂，购自赛默飞世尔（中国）有限公司;浓硫酸等其他试剂采用国药集团化学试剂有限公司产品;市售国产鱼油、进口鱼油、玉米油、橄榄油均为正规途径购买;藻油为某生物公司惠赠。
1.2 实验方法
1.2.1 H2SO4催化衍生法
参考其他学者的研究并进行适当改进[4]。将10 mg
油脂与1 mL正己烷加入到样品瓶中，漩涡混匀后移取100 μL溶液至装有聚四氟乙烯内衬的8 mL进口玻璃反应瓶中，氮气吹干溶剂。加入2 mL H2SO4-CH3OH（2%，m/m）溶液，在80 ℃烘箱中反應2～2.5 h，
每30 min漩涡混匀。反应结束后降至室温，加入1 mL正己烷、1 mL饱和氯化钠溶液，2 500 r·min-1离心5 min，
吸取上清液。然后加入0.5 mL正己烷，重复提取2次，合并上清液。氮气吹干溶剂后，加入1 mL正己烷定容，待GC检测。
1.2.2 BF3催化衍生法
将10 mg油脂与1 mL正己烷加入样品瓶中，漩涡混匀后移取100 μL溶液至装有聚四氟乙烯内衬的8 mL进口玻璃反应瓶中，氮气吹干。加入2 mL 14% BF3-CH3OH溶液，在70 ℃烘箱中反应1 h，每20 min漩涡混匀。反应结束后降至室温，加入1 mL正己烷、1 mL饱和氯化钠溶液，2 500 r·min-1离心5 min，吸取保留上清液。然后加入0.5 mL正己烷，重复提取2次，合并上清液。氮气吹干后，加入1 mL正己烷定容，待GC检测。
1.2.3 GC-FID运行参数
柱箱初始温度为100 ℃;7.5 ℃·min-1升温至250 ℃，保持30 min;He为载气;流速1.5 mL·min-1;进样量2 μL。
1.2.4 数据分析
进行平行实验，结果取平均值。利用外标法进行脂肪酸甲酯的数据分析，标准溶液的浓度选取：10.0、7.5、5.0、2.5 mg·mL-1和1.0 mg·mL-1。利用这5个浓度梯度做外标法标准曲线。
2 结果与分析
