金嘉民 王明霞 冯团
摘 要：本研究通过用邻苯二甲酸二辛酯（DOP）和氯仿（CF）对小鼠进行联合染毒，来观察染毒小鼠脂质过氧化等指标的变化。本实验按照联合作用的分析方法——2×2析因分析进行分组。选择40只昆明小鼠，体重（25±2）g。将小鼠随机分为4组，雌雄分开，每组5只，即对照组（玉米油）、DOP单独染毒组（1/10 LD50，540mg/kg）、CF单独染毒组（1/10 LD50，112mg/kg）、联合染毒组DOP（1/10 LD50）+CF（1/10LD50）。通过灌胃方式进行染毒，每天固定时间进行染毒1次，15d后处死，称重并且称量小鼠肝脏重量。计算肝脏器系数，测定肝脏组织中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的活力。与对照组比较，染毒后CF组体重升高；CF组和DOP组的肝脏器系数升高；MDA含量、SOD及GSH-PX活力均降低（P<0.05），CF与DOP联合染毒对SOD及GSH-PX表现协同作用（P<0.05）。CF與DOP联合染毒对小鼠肝脏存在氧化损伤作用。
关键词：邻苯二甲酸二辛脂 氯仿 肝脏毒性
中图分类号：R11 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2018）06（a）-0231-02
氯仿（CF）是工业上广泛使用的有机溶剂及日常生活饮用水中主要的消毒副产物之一。邻苯二甲酸二乙基己酯，又称邻苯二甲酸二辛酯（DOP），常作为塑料制品的增塑剂使用。人们在日常生活中通过多种途径接触二者，对人体造成不同程度的危害[1-3]。以往多数研究是探讨某一化学物质不同剂量的毒性影响，对二者的联合毒副作用研究较少。前期有关二者联合染毒后对小鼠脑组织及肝脏酶等的影响[4-6]，本研究继续探讨二者联合染毒副对小鼠肝脏脂质过氧化指标的影响，以推测二者联合染毒后对肝脏是否存在氧化损伤作用。
1 材料与方法
1.1 主要仪器与试剂
低速自动平衡离心机（北京医用离心机厂）、-80℃低温冰箱（SANYO，Japan）、紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）、电子分析天平（上海上平仪器厂）、数显恒温水浴锅（金坛市杰瑞尔电器有限公司）、KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、涡旋混匀器 VORTEX SHAKER）、氯仿（北京北化精细化学品有限公司）、邻苯二甲酸二辛酯（天津市光复精细化工研究所）。
1.2 实验动物分组及染毒
成年昆明普通小鼠40只，体重（25±2）g，购自齐齐哈尔医学院动物实验中心。实验小鼠常规饲养，自由进食及饮水。
将昆明普通小鼠按体重随机分为四组：即CF组（1/10LD50，112mg/kg）、DOP组（1/10 LD50，540mg/kg）、DOP（1/10LD50）+CF（1/10LD50）联合染毒组、对照组（玉米油），雌雄分开，每组5只。连续灌胃染毒15d，每天固定时间染毒一次，称量记录体重，染毒容积10mL/kg，对整个实验过程进行动态观察。
1.3 检测指标
灌胃染毒15d后称量记录体重并处死全部小鼠，迅速摘取肝组织，称重以计算肝组织系数。其余组织液氮速冻后置于-80℃冰箱保存备用。每只小鼠称取0.4g肝脏，加入3.6mL生理盐水，制备成10%的匀浆液，以4000转/分离心10min，取上清。考马斯亮蓝法测定匀浆中蛋白含量；用SOD、MDA、GSH-PX试剂盒采用分光光度法测定肝脏组织匀浆中丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX），超氧化物歧化酶（SOD）的活力。
1.4 统计学方法
实验数据均以（）表示。采用 SPSS 22.0软件进行统计分析，联合作用评价采用2×2析因方差分析，检验水准α=0.05。
2 结果
⑴小鼠体重及脏器系数的测定结果DOP和CF联合染毒对小鼠体重及脏器系数的影响见表1。
与对照组比较，DOP组体重无明显差异（P>0.05）；CF组染毒后体重下降，差异有统计学意义（P<0.05）；CF组与DOP组的小鼠肝脏系数高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；DOP与CF联合染毒对小鼠体重、肝脏系数的影响尚未表现出联合作用（P>0.05）。
⑵小鼠肝组织中脂质过氧化指标的测定结果DOP与CF联合染毒对小鼠肝脏脂质过氧化指标的测定结果见表2。
同对照组比较，CF染毒组、DOP染毒组小鼠肝组织中MDA含量、SOD及GSH-PX活力均降低，差异有统计学意义（P<0.05）；DOP与CF联合染毒对小鼠SOD及GSH-PX活力表现出协同作用（P<0.05）。
3 讨论
本研究结果显示，CF染毒组与DOP染毒组小鼠肝脏组织中MDA含量、SOD及GSH-PX活力均低于对照组，DOP与CF联合染毒对小鼠肝脏组织中MDA含量尚未表现出膜脂过氧化物的损伤，SOD及GSH-PX活力表现协同作用。表明在该实验条件下CF与DOP单独染毒可对肝脏清除过氧化物和羟自由基产生抑制作用，可对肝脏产生过氧化损害作用，CF与DOP联合染毒时对肝脏SOD及GSH-PX活性产生了明显抑制作用。推测二者可能通过以下两条途径对肝脏产生氧化损伤：一方面抑制了机体正常的自由基生成过程，导致MDA含量下降；另一方面使机体对抗脂质过氧化的酶促系统受损，导致SOD和GSH-PX的合成减少或是活性降低。
参考文献
[1]于淑江，安丽红，李杰，等.邻苯二甲酸二（2一乙基己基）酯毒性作用[J].预防医学论坛，2005，11（2）：236.
[2]郑文芝，周永强，张霖霖.PVC 塑料制品中增塑剂PAEs在水环境中迁移规律的研究[J].广东化工，2006，33（3）：29-30.
[3]张东，薛雅琳，朱琳，等.邻苯二甲酸酯毒性及检测方法研究进展[J].粮油食品科技，2014，22（5）：70-75.
[4]王明霞，娄峰阁，于唐丽，等.氯仿和邻苯二甲酸二辛酯联合染毒对小鼠肝脏酶的影响[J].环境与健康杂志， 2017，34（9）：775-777.
[5]王明霞，赵淑华，杜琳琳，等.邻苯二甲酸二辛酯和氯仿联合染毒对雌性小鼠单胺类神经递质的影响[J].齐齐哈尔医学院学报，2015，36（36）：5462-5463.
[6]王明霞.邻苯二甲酸二辛酯和氯仿联合染毒对小鼠脑组织的影响[D].吉林大学， 2013.
