万历皇帝的皇后有孝端显皇后王氏和孝靖皇后王氏。其中孝端显皇后是万历皇帝生前唯一的皇后，是他在位期间亲自所册立，万历皇帝想要立她的儿子为太子，但她却始终未能生下嫡子。孝敬皇后则是明光宗的生母，她身份低微，虽然为万历皇帝育有一子，却因违背了光宗的意愿而备受摧残，度过了凄凉的一生，她的孙子明熹宗登基之后将她追封为皇后。
孝端显皇后名叫王喜姐，余姚人，永年伯王伟之女，她在礼部选秀中脱颖而出，被册立为皇后。王喜姐行事端谨，贤良淑德，做皇后时常常将后宫的开支分作赈饥荒和贴补军用的用途，还多次让万历皇帝宽恕在他面前直言进谏的大臣，奖励忠臣。
孝敬皇后即王恭妃，她原本是慈宁宫的宫女，被万历皇帝偶然宠幸，生下了朱常洛，后来被封为恭妃，又依次晋升为贵妃、皇贵妃。太后和群臣一直坚持谏言明神宗立她王恭妃的儿子为太子，而明神宗本人却并不愿意，因此迁怒于她，冷落她、软禁她，她不仅被宠妃迫害，甚至被奴才欺凌，处境凄惨，最终悲愤而亡。
