020答：【这个问题本人不是很专业，部分资料来源网络，在此对原作者致谢！！！】构建一个shRNA表达载体，将此载体用电穿孔的方法注射入小鼠胚胎干细胞，shRNA在小鼠内发挥作用，沉默目的基因。
什么是RNA干扰？RNA干扰（RNA interference,RNAi），又称转录后基因沉默，是指将特异性同源双链RNA导入到细胞内，使目的基因的不表达或表达水平下降。
什么是shRAN？shRNA"是short hairpin RNA的缩写，即，"短发夹RNA"。
shRNA 包括两个短反向互补序列，中间由一顶端环（loop)序列分隔的，组成发夹结构，通常由细 胞内源的RNA聚合酶III (RNA polymerase III)启动子控制转录，shRNA序列的末端连接 5-6个T作为RNA聚合酶III的转录终止子。
shRNA也可以由其它RNA聚合酶的启动子转录产生。
各名词的介绍：miRNA：（microRNA)是一类由内源基因编码的长度约20-24个 核苷酸的非编码单链RNA分子，在动植物中参与对大量基因的表达调控。
到目前为止，在动 植物以及病毒中已经发现四千多种miRNA分子。
大多数miRNA基因以单拷贝、多拷贝或基 因簇（cluster)的形式存在于基因组中。
每种miRNA可以调控多个靶基因，而几种miRNA 也可以共同参与调节同一基因，组成复杂的调节网络。
据推测，miRNA调节着人类一半以上 基因的表达。
miRNA存在多种形式，最原始的是pri-miRNA ;pri-miRNA经过Drosha加工后， 成为pre-miRNA，即miRNA前体，长度大约为50-90个核苷酸；pre-miRNA再经过Dicer酶酶 切后，成为长约20-24个核苷酸的成熟miRNA。
miRNA主要通过抑制翻译和加速mRNA的脱 腺苷酸化抑制靶基因表达，其机制有别于siRNA介导的mRNA降解。
siRNA：(Small interfering RNA, siRNA)是指一种小 RNA 分子 (约21-25个核苷酸），可由Dicer (RNA酶III家族中对双链RNA具有特异性的酶）从其前体 (比如dsRNA、shRNA等）加工而成，也可由化学方法合成或由其它蛋白加工产生。
siRNA是 siRISC的主要成员，激发与之序列互补的目标RNA被迅速切割降解，导致目标基因的沉默， 因此成为RNAi中的关键功能分子。
RNAi：（RNA interference, RNA干扰）是指在进化过程中高 度保守的、由双链RNA(dsRNA)诱发的、高效特异性降解具有互补配对序列的RNA的现象。
由于使用RNAi技术可以特异性关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因 功能和传染性疾病及肿瘤的基因治疗等领域。
dsRNA介导的RNAi现象在真菌、果蝇、拟南 芥、锥虫、水螅、涡虫、斑马鱼等多种真核生物中均有发现，而且在植物中的转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing，PTGS)、共抑制（cosuppression)及 RNA 介导的病 毒抗性、真菌的抑制（quelling)现象也均属于RNAi在不同物种的表现形式。
如何产生小干扰RNA？在活体中产生"小干扰RNA"(siRNA)的一种办法是，将siRNA序列作为"短发夹"的 一部分克隆进质粒载体中。
当送入动物体内时，该发夹序列被表达出来，形成一个带有顶端 环结构的"双链RNA"（shRNA)，被细胞内的Dicer蛋白所识别和加工，产生有功能的siRNA。
shRNA的作用：shRNA可以显著增强Dicer依赖型的siRNA 表达前体一shRNA对靶基因的抑制效率，具有表达效果更强、抑制效率更高等优点。
使用的shRNA载体的现有缺点：效率不高。
往往需要设计多个shRNA才能保证有1-2个shRNA能对靶基因达到70% 以上的抑制效果。
脱革G作用（off-target)。
siRNA通过与mRNA部分互补配对，以类似 miRNA的作用方式非特异性抑制靶基因以外其它基因的表达。
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注入RNA编码的蛋白质剪切与连接酶，就可以了，之后小鼠会得癌症死去。
身上长满肿瘤，就和美国吃了转基因大豆的小鼠一样。
美国转基因大豆不能吃。
