袁文声
[關键词] 无偿献血; 血型不符; 原因;处理措施
[中图分类号] R446 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2021）20-0150-04
Reasons and treatment measures for ABO blood type inconformity of blood donors
YUAN Wensheng
Department of Quality Control， Zhongshan Center Blood Bank in Guangdong Province， Zhongshan 528400，China
[Abstract] Objective To put forward measures to reduce the blood type inconformity rate and improve the blood quality and safety by analyzing reasons for blood type inconformity among unpaid blood donors. Methods The blood type test data of 193，289 unpaid blood donors in Zhongshan Center Blood Bank from January 2016 to December 2019 were retrospectively analyzed. The blood types of the first blood donors were screened by the cardboard method， and the blood types recorded by the blood information management system for the second blood donors were used as the primary blood types. The blood was collected and reexamined by microplate enzyme plate analyzer to classify and count the numbers of ABO blood type inconformity cases were classified and counted， calculate the inconformity rate， and analyze the reasons for the blood type inconformity. Results From January 2016 to December 2019， a total of 193，289 people were tested for the blood type， including 52，188 cases of type A， 48，322 cases of type B， 79 248 cases of type O and 13，531 cases of type AB. A total of 139 cases of blood type inconformity were found， including 119 cases （85.61%） of blood type inconformity in the primary screening and 23 cases（16.55%） of blood type inconformity between the positive and negative stereotypes. In 119 cases of blood type inconformity， B and A antigen missed detection accounted for 42.86% and 9.24%， respectively. The blood type inconformity in the primary screening was the main cause of blood type inconformity. A total of 8 cases of positive irregular antibody were found， including 2 cases of subtype A， 1 case of subtype B， 2 cases of condensation agglutinin， and 10 cases of other reasons. Conclusion The error of blood type primary screening is the main cause of blood type inconformity. In case of blood type inconformity， the reasons should be analyzed according to specific problems and corresponding treatment measures should be taken to ensure the accuracy of blood type detection and finally ensure the safety of blood for clinical use.
[Key words] Blood donation without repayment; Blood type inconformity; Reason; Treatment measure
根据红细胞表面有无特异性抗原（凝集原）A和B来划分的血液类型系统。ABO血型系统是1900年奥地利兰德斯坦纳发现和确定的人类第一个血型系统。根据凝集原A、B的分布把血液分为A、B、AB、O四型。ABO血型定型对于临床输血至关重要，《献血者健康检查要求（GB 18467-2011）》[1]要求献血前后均要对献血者进行ABO血型检测，并进行正确定型。献血者ABO血型定型错误会在临床用血时引起血管内溶血，导致致命性输血反应，出现严重的医疗事故，故此保证ABO血型准确无误是采供血机构最重要的工作之一[2]。但在实际工作中，ABO血型不符（包括初筛血型不符、正反定型不符）的现象很常见，为了减低血型不符的发生率，本研究回顾性分析本血站2016年1月至2019年12月的无偿献血者血型检测数据，通过分析血型不符合原因，提出减少不符率的措施，以提高血型检测的准确性，保证临床用血安全，现报道如下。
1对象与方法
1.1 研究对象
2016年1月至2019年12月献血者ABO血型不符的血液标本139例，排除重复献血者标本计算。纳入标准：①血清无溶血，无脂肪血、无颜色异常，血清效价及亲和力正常者;②血红蛋白浓度正常者。排除标准：①不符合献血者健康检查标准者;②献血前 1 周内服用过磺胺类药物者。
1.2试剂及仪器
抗-A、抗-B试剂（上海血液生物医药有限公司）;抗-AB、抗-H、抗-A1（德国CE-LD）;抗球蛋白试剂（上海血液生物医药有限公司）;标准A细胞、B细胞、O细胞（长春博德生物技术有限公司）、A2细胞、不规则抗体筛选细胞（长春博德生物技术有限公司）;血型凝胶卡（戴安娜）;KA-2200细胞洗涤离心机（日本 SEROMATIC II）。
1.3方法
1.3.1初筛 初次献血者的血型初筛采用平板凝集法，将1滴抗A、抗B试剂滴于血型板上下两个检测孔内，再加入1滴10%被检红细胞血液，该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞，及时在检测孔内将血细胞悬液和血型试剂充分混匀，前后缓慢摇晃血型板2 min左右，肉眼判断结果，并记录，然后在无偿献血登记表的血型栏上登记血型结果，并在血型标签上用红笔在对应的血型上画红圈，最后将血型信息录入血站信息管理系统。非初次献血者免做血型初筛检测，献血档案血型直接作为初定血型。
1.3.2复检 血液采集完成后，从血袋留样袋留取4.5～5.0 mL EDTA抗凝的检测标本，轻轻颠倒标本试管5～8次，使血液與抗凝剂充分混匀，在标本试管上贴上献血码，送血站检验科复检血型，检验科用全自动血型分析仪（凝集法）进行ABO血型、RhD血型检测，若出现血型不确定、与初筛血型不符、正反定型不符、不规则抗体阳性等检验结果时必须做血型确定试验，由检验科授权工作人员剪取相应血袋导管标本，连同原管标本用微柱凝胶卡法或血清法进一步鉴定，鉴定操作严格按照《全国临床检验操作规程》[3]进行。
2 结果
2.1 血型不符情况
2016年1月至2019年12月共采集193 289例标本，其中A型52 188例，B型48 322例，O型79 248例，AB型13 531例。检验科共检测出ABO血型不符标本139例，约占0.072%，其中119例与初筛血型不符，23例正反定型不符，3例同时也是初筛血型不符。
2.2 初筛血型不符的原因及占比
血型不符的主要原因是与初筛血型不符，与初筛血型不符占血型不符的85.61%（119/139），按原因分为B抗原漏检、A抗原漏检、A或B抗原误检、人为错误，4种原因的例数及占比。
2.3 正反定型不符的原因及占比
正反定型不符在血型不符中占16.55%（23/139），归纳原因有不规则抗体阳性占比34.78%（8/23），亚型占比13.04%（3/23），冷凝集素占比8.70%（2/23），其他原因（包括标本、人员操作、试剂和仪器原因）占比43.48%（10/23）。
3 讨论
《血站技术操作规程》（2019版）中规定，ABO 血型正反定型是献血者血液样本必检的检测项目之一，原因是没有 ABO血型的正确定型，临床用血安全就没法得到保障。准确无误的 ABO血型结果关系到用血者的生命与健康，错误的ABO血型结果可能导致严重的输血反应，甚至会危及用血者的生命安全，ABO血型的正确定型为临床输血的安全性提供强有力的保障。我站对献血者血型的检测严格按照《血站技术操作规程》（2019版）要求实行二次检测，初筛采用纸板法进行正定型，试管留样后检验室进行正反定型复检。初筛、复检到最后的结果发布更是层层把关，确保发往临床的每一血液产品血型的准确性，保证临床用血安全，而在血型初筛、复检过程中常常受环境温度、试验条件、人员素质、仪器设备等影响，血型不符的情况无法避免。为降低血型不符率，提高血液安全性，本研究现对血型不符情况进行回顾性研究。
本研究结果显示，我站2016年1月至2019年12月共采集193 289例标本，共检测出ABO血型不符标本139例，约占0.072%，低于2010—2013年石家庄地区献血者初筛与复检血型不符率的0.149%[4]，其中与初筛血型不符119例，初筛不符合率为0.062%，低于南京地区2009—2015年无偿献血初筛血型错误率0.143%[5]，郑州地区2009—2013年无偿献血者初筛错误率0.163%[6]，十堰市地区2004—2013年无偿献血初筛血型错误率0.089%[7]，安阳地区2015—2017年无偿献血者初筛血型不符率0.27%[8]，高于上海地区2015—2017年无偿献血血型初筛错误率0.03%[9]。正反定型不符 23例（其中3例既是初筛不符也是正反定型不符），正反定型不符合率为0.012%，低于贵阳地区2016—2017无偿献血人群中ABO血型正反定型不符率0.075%[10]和长沙地区2013—2017年无偿献血者血型正反不符率0.026%[11]。
初筛血型不符是血型不符的主要原因，占比85.61%（119/139），初筛血型不符原因分为3种情况，其中抗原漏检共62 例，占比52.10%（62/119），是导致初筛血型不符的主要原因。我站多为团体采血，常出现献血者集中排队献血，所以在采血现场时，初筛工作人员为了急着出结果，常没能按试剂说明书要求，让血型抗原抗体有充分反应时间，导致反应不完全，从而造成 A、B抗原漏检，故此血型初筛时应严格按标准操作规程执行，充分混匀标本和试剂，避免交叉污染[9]，确保抗原抗体反应时间充分。另外温度对于血型试剂抗A、抗B的效价、亲和力影响很大，故此造成初筛血型错误的原因还有抗A、抗B试剂存放不当，导致效价降低[12]，所以应确保血型试剂的保存温度在2～8℃范围，开封试剂后应立即在试剂瓶身上标明日期，开封后的使用期限不能超过两周，每次使用后须拎紧试剂瓶盖，再次使用前应检查试剂的颜色和澄清度，这两个措施降低了气温和试剂因素对初筛血型准确性的影响。
初筛血型不符的原因如下：（1）抗原漏检：抗原漏检多见的情况是B型错定为O或AB型错定为A型，此两类情况统称为为B抗原漏检，另外A型错定为O或AB型错定为B型统称为A抗原漏检，B抗原漏检较A抗原漏检多见，两者分别占初筛血型不符的42.86%（51/119）和9.24%（11/119），经分析原因有两个：①试剂的抗B效价低于抗A效价;②红细胞B抗原位点分布较A抗原少。对此可采取以下措施：对比不同厂家生产的抗A、抗B试剂，选用抗体效价高的，特别是抗B效价高的。（2）抗原误检，共24例，占比20.17%（24/119），表现为不应凝集的孔出现疑似凝集反应，若凝集反应只出现在环境温度较低时，则可能是血浆中含有强凝集素;抗原误检的其他因素有交叉污染、标本和试剂比例不当或操作人员不良操作习惯造成的假凝集有关。（3）抗原交叉定型错误，表现为A型错定为B型;B型错定为A型;O型错定AB型;AB型错定O型，共有33例，占初筛血型不符的27.73%（33/119），抗原交叉定型错误多为人为原因造成，如将抗A和抗B血清滴错位置，判断结果时不认真，没有及时发现错误;或贴错标签或圈错标签血型或扫描错血型标签[4]，可见，除了试剂及标本因素，人为因素是造成血型初筛不符的重要原因，故此要降低血型初筛不符的发生率，应减少人为因素的影响，可采取以下措施：①优化绩效计算方法，订立初筛不符合率目标，将达到初筛不符合率目标的工作人员扣分处理，从制度上增强工作人员的能动性;②通过定期培训增强初筛工作人员理论知识、操作和处理特殊情况的技能;③重视采血前、中、后等环节血型核对的重要性，避免因为人为错误造成的血型初筛错误。
另一方面，正反定型不符占血型不符的16.55%（23/139），而造成正反的原因有3个：①因疾病原因引起的血型正反定型不符;②血液标本不规则抗体阳性、亚型、冷凝集素内在等;③其他外在原因，包括标本、人员操作、试剂和仪器原因等。而本研究对象均是健康的献血者，故不考虑疾病原因。本研究中不规则抗体阳性8例。不规则抗体是血清中抗A、抗B以外的其他血型抗体，会对ABO血型鉴定造成干扰，表现为反定型不应该凝集的一侧出现凝集，导致血型正反定型不一致。对于不规则抗体筛查阳性的标本，可采用三人份以上O细胞混合，用生理盐水洗涤3次，制备成压积红细胞，与待检血浆等量混合，于4℃冷吸收30 min，再对待检血浆标本进行血型鉴定[12-13];亚型3例，ABO亚型实际上是在常规A、B、AB、O四种血型下再进一步细分出来的血型，是一种弱表现型，由遗传因素导致，其红细胞携带的A或B抗原弱化，正定型抗A或抗B有时不能测出抗原而不出现凝集而被发现，造成定型困难，A亚型包括A2、A3、Ax、Am、Aend、Ael和Ay等，B亚型包括B3、Bx、Bm、Bend、和Bel等，此外还有A2B、AxB等，顺式AB型，cisAB、B（A），O亚型和孟买型、类孟买型等。最常见的ABO亚型出现在A型人群中，以A1型、A2型最多，进一步鉴定需正定型增加抗H、抗A1、抗AB，抗AB用来确认弱A、B抗原，抗A1用于鉴定A亚型，抗H用于鉴定亚型及孟买型，反定型增加O细胞、A1细胞、A2细胞，用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体对定型的影响，对于在正定型中不出现凝集的亚型，如Ael和Bel，还应进行吸收放散试验证实抗原的存在[14]，而血型亚型的判断主要根据以下几点：①红细胞与抗A及抗A1的凝集强度，比如说A2亚型与抗A试剂发生反应的凝集一般为4+，而与抗A1不凝集;②红细胞与抗AB的凝集强度，如A2较A1强;③红细胞上H抗原活性强弱，如A2较A1强;④血清中是否存在抗A1抗体，A2存在，而A1不存在;⑤吸收放散试验证明A或B抗原的存在;⑥家系调查。冷凝集素2例，冷凝集几乎均为IgM类完全抗体，但也有报道IgG或IgA增高，高效价冷凝集素在体外4℃或室温条件下可与自身红细胞发生非特异性凝集反应，可出现正反定型全凝集的现象，凝集反应的高峰在0～4℃，当温度回升至37℃时凝集消失。用37℃生理盐水洗涤红细胞，去除红细胞表面附着的冷凝集素，可获得可靠的正定型结果，血型检定时冷凝集素的影响作用是不可忽视的，發现结果明显不符时应及时查明原因，排除干扰，以便获得准确的检验结果。对于血型鉴定过程中出现的极弱或弱阳性标本应加强复查，避免假阳性的发生。因冷凝集素受温度影响较大，一般在20℃以上不发生凝集反应，所以实验室应具备取暖设施，在寒冷的冬季保证实验室室温在20℃以上，避免冷凝集素影响实验结果;其他原因（包括标本、人员操作、试剂和仪器原因）10例，应排除人为因素、试剂因素及标本自身因素的干扰，然后严格按照操作规程重复试验[15]。整改措施包括：①加强工作人员的业务和操作技能培训，增强工作人员的理论和操作技能，要特别强调核对的重要性，工作中对每一个步骤都仔细核对，发现可疑结果时不能怕麻烦，重复检测，必要时更换更敏感的方法检测，杜绝血型判定错误;②实验室配备必要的设备，如购买读片灯，将微板置于读片灯上，保证足够的光线，便于目测观察结果;③推荐使用一次性微板，避免器材污染、不干燥等引起血型判定错误;④试剂效价，抗原与抗体比例对实验结果影响较大，故此应避免试剂长时间放于试剂槽内，应勤洗试剂槽，勤换新鲜试剂，保证试剂的效价，从而保证实验结果的准确性;⑤标本抗凝不足会影响实验结果，故标本留样时应使血液与抗凝剂充分混合，保证标本达到充分的抗凝效果;⑥标准血清效价太低，亲合力不强，如抗A血清效价不高可将A2型误为O型，A2B型误为B型，故此购买试剂红细胞时尽量要求供货商提供最新批号产品。
综上所述，当血型检测出现血型不符时，首先应排除人为因素，如操作错误、贴错标签;试剂因素，如试剂过期、效价低;标本自身因素的干扰，如溶血、脂血、亚型、含不规则抗体、冷凝集素等，然后严格按照操作规程重复试验，根据具体问题分析原因并采取相应处理措施，以确保血型检测的准确性，最终保证临床用血安全。
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（收稿日期：2021-01-25）
