梁宗英 侯继申 张乐 张志民 孙光蕊 辛国华
[摘要]目的 探讨调亡抑制基因Survivin和乙酰基转移酶p300在食管癌（EC）组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法 用免疫组化法检测2016年2月～2018年2月我院胸外科90例EC组织和40例癌旁组织Survivin和p300的蛋白表达水平;分析Survivin和p300蛋白与临床病例特征的关系及两者的相关性。结果 ①癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）;②癌组织中p300的阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）;③Survivin的表达与EC TNM分期、肿瘤分化程度和淋巴转移有相关性，差异有统计学意义（P<0.05）。p300的阳性表达率与肿瘤分化程度和淋巴结转移有相关性，差异有统计学意义（P<0.05）;④Survivin和p300在EC中的表达成正相关（r=0.657，P<0.05）。结论 Survivin和p300的表达水平与EC的分化程度及转移有相关性，且两者可能在EC的发生、发展和转移等方面发挥协同作用。
[关键词]调亡抑制基因;乙酰基转移酶p300;食管癌;临床意义
[中图分类号] R735.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2019）8（b）-0043-04
[Abstract] Objective To investigate the expression of Survivin and acetyltransferase p300 in esophageal cancer （EC） and its relationship with clinical characteristics. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of Survivin and p300 proteins in 90 EC tissue and 40 para-carcinoma tissue in our Department of Thoracic Surgery， Affiliated Hospital of Chengde Medical College from February 2016 to February 2018. The relationship between Survivin and p300 protein， and clinical characteristics and the correlation were analyzed. Results ①The positive expression rate of Survivin protein in cancer tissues was higher than that in para-carcinoma tissues （P<0.05）. ②The positive expression rate of p300 in cancer tissues was higher than that in para-carcinoma tissues with a statistical difference （P<0.05）. ③The expression of Survivin was associated with TNM stage of EC， tumor differentiation and lymphatic metastasis with statistical significance （P<0.05）. The positive expression of p300 was correlated with tumor differentiation and lymphatic metastasis （P<0.05）. ④The expression of Survivin and p300 was positively correlated in EC and the correlation coefficient （r=0.657， P<0.05）. Conclusion The expression levels of Survivin and p300 are correlated with the degree of differentiation and metastasis of EC， and they may play a synergistic role in the occurrence， development and metastasis of EC.
[Key words] Apoptosis-inhibiting gene; Acetyltransferase p300; Esophageal cancer; Clinical significance
食管癌（EC）是常見的消化系统肿瘤之一，我国EC发病率和死亡率均居世界首位[1]。EC的早期发现、早期诊断和早期治疗是改善预后最有效的方法，因此寻找早期诊断、病情监测和判断预后的敏感有效的监测指标成为近年来研究重点。EC的发生、发展是多因素、多途径、多种癌基因激活和抑癌基因失活的渐进过程。关键基因及蛋白的异常表达在EC的发生和发展过程中起关键作用。研究表明，调亡抑制基因Survivin和乙酰基转移酶p300参与了多种肿瘤的凋亡、侵袭和转移[2-3]。但迄今为止，Survivin和p300在EC发生发展过程中是否存在协同作用鲜有文献阐明。本研究用免疫组织化学技术检测Survivin和p300蛋白在EC癌组织中的表达，分析其与EC人口学特征、分化程度、TNM分期、肿瘤侵袭性、淋巴转移的关系及两者在其中的协同作用，为EC的早期诊断和临床制定治疗方案提供依据。
1资料与方法
1.1一般资料
选择2016年2月～2018年2月我院胸外科治疗的90例EC手术患者，其病理类型全部为鳞状细胞癌。纳入标准：①所有患者的临床资料完整;②均为首发病例;③所有患者术前无化疗、放疗及免疫治疗史。排除标准：①患者的临床资料不完整;②二次复发病例;③患者术前有放、化疗及其他药物治疗史。其中男54例，女36例;年龄38～72岁，平均（59.23±3.69）岁;≥60岁59例，<60岁31例;TNM分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，Ⅲ期28例;细胞分化程度高、中、低分别为34、31、25例;有淋巴转移54例，无淋巴转移36例。另选40例距癌组织>6 cm癌旁正常上皮组织标本作为对照组。本研究经我院医学伦理委员会审批通过，所有患者对本研究知情同意并签署知情同意书。
1.2方法
5 μm石蜡块切片，经二甲苯脱蜡水化、枸橼酸盐修复、H2O2浸润、PBS冲洗、山羊血清封闭;Ⅰ抗温育，Ⅱ抗温育，中间PBS洗涤，DAB显色、苏木素染色;乙醇脱水后二甲苯透明及中性树胶封固。兔抗人BIRC5/p300单克隆抗体购自上海北诺生物科技有限公司，批号PA1848;鼠抗人Survivin单克隆抗体购自上海煊翎生物科技有限公司，批号abx038170。免疫组化试剂盒购自长沙达尔锋生物科技有限公司，批号BIH0003。
1.3观察指标及评价标准
观察Survivin和p300在EC和癌旁组织中的表达;分析Survivin和p300的表达与临床病例特征的关系;Survivin和p300在EC中表达的相关性。评价标准：400倍光镜下随机选10个高倍视野，每视野数100个细胞;Survivin阳性结果：胞质出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞占肿瘤细胞的百分比>10%;p300阳性结果：胞质和胞核出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，阳性细胞占肿瘤细胞的百分比≥10%。
1.4统计学方法
采用SPSS 18.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验;计数资料以率表示，采用χ2检验;相关性分析采用Kappa一致性检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 Survivin和p300在EC和癌旁组织中的表达
Survivin在癌组织中阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）。p300癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。
2.2 Survivin和p300的表达与临床病理特征的相关性
Survivin蛋白的表达与患者性别、年龄差异无统计学意义（P>0.05），与TNM分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移相关，差异有统计学意义（P<0.05）;p300的阳性表达与肿瘤的分化程度和淋巴转移相关，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。
2.3 Survivin和p300在EC中的表达
Survivin和p300在EC中的表达成正相关（r=0.657，P<0.05）（表3）。
3讨论
EC是危害人类健康的恶性肿瘤之一。近年来，我国EC的发病率和死亡率虽呈下降趋势，但发病率和死亡率仍处于相当高的水平[1]。EC的发生和发展是一个多基因参与、多阶段的复杂过程。失活的抑癌基因通过参与细胞的凋亡为异常细胞提供生存之机，促使EC的发生和发展。
Survivin是功能最強的细胞凋亡抑制因子，它的表达与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关[4-10]。Survivin可干扰细胞凋亡、促进细胞有丝分裂和血管形成。Survivin的高表达可提高肿瘤细胞的存活和生长能力，对肿瘤的诊治及预后有深远的意义[11]。本研究结果显示，在EC组织中Survivin阳性表达明显高于癌旁癌旁组织（P<0.05），Survivin蛋白在正常组织中基本不表达，在EC组织过度表达。提示Survivin可能通过直接或间接作用抑制EC细胞的凋亡从而促进EC的发展。Survivin可能通过调控有丝分裂促进肿瘤细胞的异常增殖并抑制凋亡而参与EC的侵袭与转移[12]。研究者通过RNA干扰技术开展EC与Survivin关系的研究，发现沉默Survivin基因能抑制EC109细胞的增殖，增强Caspases的活性，阻滞细胞周期的进展，诱导细胞凋亡[13]。Survivin在EC的增殖和转移过程中起到了重要的作用，是预测EC预后的重要分子标志物。同时本研究结果显示，Survivin的表达与癌组织分化程度、TNM分期、淋巴转移密切相关（P<0.05），Survivin阳性表达率随着EC的恶性程度和TNM分期的增加而逐渐增加，在肿瘤浸润程度和淋巴结是否转移两组间亦有显著性差异。实验结果与柴小军等[14]的研究结果一致。EC淋巴结转移者Survivin蛋白表达升高，提示其可抑制癌细胞的凋亡， 促使肿瘤恶性程度增强，导致EC容易发生转移。牛朝霞等[15]证实靶向抑制Survivin 基因的表达能显著降低干扰组Eca-109细胞的体外侵袭与迁移能力。因而Survivin表达与EC侵袭、转移及预后的关系意义重大。Survivin 蛋白表达联合ECTNM分期、淋巴转移及分化程度等临床病理特征评估后发现，Survivin蛋白阴性，TNMⅠ期、肿瘤分化程度高、无淋巴转移者，患者预后较好，可能与Survivin 蛋白表达缺失，抑制肿瘤细胞凋亡的功能丧失有关，细胞增殖与凋亡保持平衡，提高了早期患者的生存期。当Survivin蛋白阳性时，细胞恶性程度高、TNMⅡ、Ⅲ期、有淋巴结转移者，预后较差。可能与Survivin过表达后正常的凋亡减缓，促进肿瘤细胞无限制生长有关。同时Survivin过表达可能促进细胞的有丝分裂和血管的生成以及肿瘤的恶性转化，导致了肿瘤的局部浸润和远处迁移。
p300是乙酰基转移酶中重要的成员，可通过调节蛋白乙酰化水平而参与肿瘤的发生、发展和转归。p300在多种肿瘤组织中的高表达与肿瘤患者的预后密切相关[16-18]。陆平等[19]通过分析肺癌组织发现，p300在肺鳞癌和腺癌中高表达，与肿瘤的分化、分期及淋巴结转移密切相关。国内外对p300与肿瘤的发生进行了许多研究，但联合Survivin和p300与EC发生关系的报道鲜见。本研究结果显示，p300在癌组织中表达的阳性率为68.89%，癌旁组织中的阳性表达率为22.50%。p300的阳性表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移有相关性（P<0.05），提示 p300可能参与并促进了EC的发生和发展。
本研究结果显示，Survivin和p300在EC中表达成正相关（r=0.657）。提示Survivin和p300可能共同参与了EC的发生发展过程，并在肿瘤的浸润和转移中发挥了重要作用。尽管在胃癌和子宫颈癌中均可见Survivin和p300的表达报道[20]，但两者联合在EC发生发展中发挥作用报道较少。p300是肿瘤抑制基因p53的共激活子，调节p53的活性及蛋白的稳定性使细胞周期停滞和细胞凋亡达到一个平衡状态。研究显示，EC中p53与Survivin 的表达成显著正相关，且两者与肿瘤淋巴结转移有关[21]。Survivin和p300是通过p53还是其他基因在EC中发挥协同作用仍有待进一步探讨。
综上所述，Survivin和p300在EC组织中的高表达与EC密切相关，且Survivin和p300在EC的发生、发展过程中有共同促进作用，可能是EC发生的重要机制。今后可以将Survivin和p300作为切入点，深入研究其机制，为EC的基因靶向治疗提供新的理论依据。
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（收稿日期：2018-12-24 本文编辑：崔建中）
