邸晓华 柴鸣荣 黄桂兰
[摘要]目的 檢测EV71和COXa16感染手足口病（HFMD）患儿血清白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-37（IL-37）水平并分析其意义。方法 选取2012年1月1日～2017年12月31日我院儿科收治175例HFMD患儿作为研究对象，其中确诊的单纯EV71感染患儿100例，单纯CoxA16感染患儿65例，EV71和CoxA16合并感染患儿10例，另选取同期50例健康体检儿童作为对照组，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清IL-6和IL-37水平并分析其关系。结果 EV71组、CoxA16组及EV71合并CoxA16组的IL-6、IL-37水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;EV71组的IL-6、IL-37水平均显著高于CoxA16组、EV71合并CoxA16组，差异有统计学意义（P<0.05）。EV71组重症患儿的IL-6、IL-37水平均显著高于轻症患儿，差异有统计学意义（P<0.05）。EV71组IL-6与IL-37水平成正相关（P<0.05）;EV71组IL-6与外周血单核细胞绝对值成正相关（P<0.05）;EV71组IL-37水平与外周血中性粒细胞绝对值成正相关（P<0.05）。结论 IL-6和IL-37参与了EV71和COXa16感染所致HFMD发病的病理生理过程，并与疾病的严重程度有关。
[关键词]手足口病;EV71;CoxA16;白细胞介素-6;白细胞介素-37
[中图分类号] R725.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2019）8（b）-0071-04
[Abstract] Objective To detect the serum levels of interleukin-6 （IL-6） and interleukin-37 （IL-37） in children with hand， foot， and mouth disease （HFMD） caused by EV71 and COXa16 infections and to analyze their clinical significance. Methods A total of 175 children with HFMD admitted to pediatrics department of our hospital from January 1， 2012 to December 31， 2017 were collected as subjects of study， and among of them 100 children were diagnosed with EV71 infection， 65 children with CoxA16 infection， 10 children with EV71 and CoxA16 co-infection. Another 50 healthy children at the same period were selected as the control group. Enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect the serum levels of IL-6 and IL-37 and their relationship was analyzed. Results The levels of IL-6 and IL-37 in EV71 group， CoxA16 group and EV71 combined with CoxA16 group were significantly higher than those in the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of IL-6 and IL-37 in EV71 group were significantly higher than those in CoxA16 group and EV71 combined with CoxA16 group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of IL-6 and IL-37 of severe children in EV71 group were significantly higher than those in mild children， and the differences were statistically significant （P<0.05）. There was a positive correlation between IL-6 and IL-37 levels in EV71 group （P<0.05）. The level of IL-6 in EV71 group was positively correlated with the absolute value of peripheral blood mononuclear cells （P<0.05）. The level of IL-37 in EV71 group was positively correlated with the absolute value of peripheral blood neutrophils （P<0.05）. Conclusion The IL-6 and IL-37 are involved in the pathogenesis of HFMD caused by EV71 and CoxA16 infections， and related to the severity of the disease.
[Key words] Hand， foot and mouth disease; EV71; CoxA16; Interleukin-6; Interleukin-37
手足口病（hand，foot，and mouth disease，HFMD）是一种由肠道病毒引起的常见的流行性儿科传染病，多发生于学龄前儿童。HFMD已成为一种主要的公共卫生威胁，导致亚太地区严重的发病率和死亡率[1-2]。2017年我国确诊的HFMD儿童共有1 952 435例[3]。肠道病毒71（Enterovirus 71，EV71）和柯萨奇病毒16（Coxsackievirus A16，COXa16）是轻度HFMD的主要致病因子。然而，已知一些EV71菌株与致命的神经系统并发症有关[4-6]。近年来，许多HFMD暴发与新出现的肠道病毒有关，包括COXa6，COXa8和COXa10[7]。这些肠道病毒与EV71和COXa16在许多HFMD暴发中共同传播，其可能导致病毒共感染和基因组重组。目前，EV71和COXa16致病机制尚不十分清楚。越来越多的证据表明，炎症细胞因子可能在EV71和COXa16发病中起核心作用[8]。白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-37（IL-37）均是机体炎症反应过程中的重要细胞因子，均在介导天然免疫炎症反应中起重要作用。目前，系统性研究EV71和COXa16感染HFMD患儿血清IL-6和IL-37水平的研究报道少见。本研究旨在分析IL-6和IL-37在EV71和COXa16感染HFMD患儿中的表达及其意义，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取2012年1月1日～2017年12月31日我院儿科收治175例HFMD患儿作为研究对象，其中确诊的单纯EV71感染患儿100例，单纯CoxA16感染患儿65例，EV71和CoxA16合并感染患儿10例。纳入标准：年龄30 d～12岁的HFMD患儿，HFMD诊断标准、分型参照《手足口病诊疗指南（2010年版）》[9]。排除标准：麻疹、口腔溃疡、口腔炎、水痘等非HFMD的其他出疹性疾病。EV71组中，男61例，女39例;平均月龄（21.1±4.3）个月;平均中性粒细胞绝对值（4.2±1.4）×109/L;平均单核细胞绝对值（0.4±0.2）×109/L;重症29例，轻症71例;高血压20例;皮疹92例;出冷汗27例;呕吐28例;脑炎13例;高血糖21例;发热>3 d 87例;呼吸机治疗10例。CoxA16组中，男34例，女31例;平均月龄（19.3±3.7）个月;平均中性粒细胞绝对值（4.0±1.1）×109/L;平均单核细胞绝对值（0.4±0.1）×109/L;重症10例，轻症55例;高血压15例;皮疹60例;出冷汗17例;呕吐17例;脑炎5例;高血糖15例;发热>3 d 50例;呼吸机治疗5例。EV71合并CoxA16组中，男5例，女5例;平均月齡（19.7±2.3）个月;平均中性粒细胞绝对值（3.9±1.1）×109/L;平均单核细胞绝对值（0.4±0.1）×109/L;重症4例，轻症6例;高血压2例;皮疹10例;出冷汗3例;呕吐4例;脑炎2例;高血糖3例;发热>3 d 7例;呼吸机治疗1例。另外选取50例健康体检儿童作为对照组。各组患儿的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有患儿及对照组儿童家属均签署知情同意书，本研究经医院医学伦理委员会审核批准。
1.2方法
1.2.1外周血中性粒细胞及单核细胞检测 采用全自动血球分析仪检测外周血中性粒细胞和单核细胞绝对值。
1.2.2酶联免疫吸附测定（ELISA）检测IL-6和IL-37水平 采用LEGEND MAXTM Human IL-6 ELISA Kit （Biolegend公司）和Human IL-37 ELISA Kit（MyBiosource公司）检测血清IL-6和IL-37水平，具体操作步骤参见试剂盒说明书进行。
1.3统计学方法
采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，符合正态分布的计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验，不符合正态分布者转换为正态分布后行统计学分析;计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验;相关性分析采用Pearson检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 HFDM组与对照组IL-6、IL-37水平的比较
EV71组、CoxA16组及EV71合并CoxA16组的IL-6、IL-37水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（t=5.810，P<0.0001;t=2.911，P=0.0043;t=2.748，P=0.0080;t=7.693，P<0.0001;t=3.487，P=0.0007;t=5.272，P<0.0001）;EV71组的IL-6、IL-37水平均显著高于CoxA16组和EV71合并CoxA16组，差异有统计学意义（t=3.386，P=0.0009;t=4.816，P<0.0001;t=1.324，P=0.0410;t=1.337，P=0.0350）;CoxA16组与EV71合并CoxA16组的IL-6、IL-37水平比较，差异无统计学意义（t=1.003，P=0.3183;t=1.410，P=0.1613;t=1.234，P=0.2167;t=1.098，P=0.3011）（表1）。
2.2 HFDM组重症患儿与轻症患儿IL-6、IL-37水平的比较
EV71组重症患儿的IL-6、IL-37水平均高于轻症患儿，差异有统计学意义（P<0.05）;CoxA16组、EV71合并CoxA16组重症患儿与轻症患儿的IL-6、IL-37水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）（表2）。
2.3相關性分析
Pearson相关性分析结果显示，EV71组IL-6与IL-37水平成正相关（r=0.314，P<0.01）;EV71组IL-6与外周血单核细胞绝对值成正相关（r=0.298，P<0.05）;EV71组IL-37水平与外周血中性粒细胞绝对值成正相关（r=0.257，P<0.05）。CoxA16组、EV71合并CoxA16组IL-6与IL-37水平均无相关性（r=0.089，P>0.05;r=0.064，P>0.05）。
3讨论
HFMD是一种常见的传染病，学龄前儿童多见，通常HFMD是自限性的，但少数儿童可能会出现严重的并发症，如脑膜炎，脑炎，急性弛缓性麻痹（AFP）和神经呼吸综合征。HFMD通常由EV71和CoxA16感染引起。免疫系统是一个复杂和协调的网络，其动态平衡维持机体健康。在微生物入侵后，炎症介质通过一系列途径在“级联”中产生，这导致全身性炎症反应综合征。过量产生炎症介质可能导致组织和器官损伤。因此，机体需产生各种抗炎介质以抑制过度的炎症反应并保护身体免受免疫损伤。促炎和抗炎介质共存于感染诱导的免疫应激反应中，两者的生长、衰退和平衡决定了传染病的进化、发展和预后。本研究评估了EV71和COXa16感染HFMD患儿血清IL-6和IL-37水平变化，试图比较不同EV71和CoxA16感染引起HFMD患儿机体免疫的差异，结果显示，EV71组、CoxA16组及EV71合并CoxA16组的IL-6、IL-37水平均显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;EV71组的IL-6、IL-37水平均显著高于CoxA16组、EV71合并CoxA16组，差异有统计学意义（P<0.05）;CoxA16组与EV71合并CoxA16组的IL-6、IL-37水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。提示EV71感染和CoxA16感染后激活了不同机体免疫过程。此外，在EV71感染HFMD患儿中，血清IL-6和IL-37水平与患儿症状轻重程度有关，而CoxA16感染患儿和EV71合并CoxA16感染HFMD患儿中，血清IL-6和IL-37水平与患儿轻重症程度无关。提示EV71感染激活的机体免疫可能与IL-6和IL-37有关。
近年来，国内外多数研究人员亦发现HFMD患儿可能存在多种细胞因子分泌紊乱。Han等[10]发现HFMD患儿外周血及脑脊液中IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素（IFN-γ）等炎性细胞因子升高与EV71感染并发脑干脑炎有关。Zhang等[11]发现HFMD患儿外周血GM-CSF、MIP-1β、IL-2、IL-33、IL-23分泌升高与EV71感染并发神经损伤有关。Ye等[12]发现EV71感染重症HFMD患儿血浆和脑脊髓液中IL-6、IL-8和IP-10含量均显著升高。Chen等[13]发现EV71感染患儿血清IL-6、IL-10和IL-13水平显著提高，且与疾病临床分期有关。以上结果均提示IL-6在EV71感染HFMD中极为重要。最近Cai等[14]研究发现与健康儿童相比，CoxA16感染HFMD患儿血清IL-6含量亦升高。不同于Cai等[14]报道，本研究中EV71感染HFMD患儿的血清IL-6含量均显著高于CoxA16感染和EV71合并CoxA16感染HFMD患儿。Zhang等[15]研究发现合并CoxA16感染相关脑炎中脑脊液IL-6含量低于单独EV-71感染相关脑炎患儿的脑脊液水平，进一步提示IL-6确实与不同类型的病毒感染有关。
IL-37过度产生与多种炎性或自身免疫过程相关。目前有关IL-37在不同病毒感染类型HFMD患儿血清中表达的研究比较少见。本研究结果显示，HFMD患儿血清IL-37含量显著升高，且EV71感染HFMD患儿血清IL-37含量均显著高于CoxA16感染HFMD患儿。Pearson相关性分析结果显示，EV71感染HFMD患儿血清IL-6与IL-37水平成正相关（P<0.05）;EV71感染HFMD患儿血清IL-6水平与外周血单核细胞绝对值成正相关（P<0.05）;EV71感染HFMD患儿血清IL-37水平与外周血中性粒细胞绝对值成正相关（P<0.05）。然而，CoxA16感染HFMD患儿和EV71合并CoxA16感染HFMD患儿血清IL-6与IL-37水平均无相关性（P>0.05），提示IL-6和IL-37可能在EV71感染HFMD患儿发病过程中具有协同作用，而在CoxA16感染HFMD患儿和EV71合并CoxA16感染HFMD患儿发病过程中无明显协同作用，但具体机制还有待进一步深入研究。
综上所述，IL-6和IL-37参与了EV71和COXa16感染所致HFMD发病的病理生理过程，并与疾病的严重程度有关。
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（收稿日期：2019-05-14 本文編辑：任秀兰）
