杨杰
【摘 要】目的：分析胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ）对卵巢癌细胞SKOV3中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法：持续培养细胞48h后加入不同浓度IGF-Ⅱ，继续培养18h，然后应用RT-PCR法行MMP-9mRNA测定，应用明胶酶谱法对MMP-9蛋白水平变化情况进行半定量测定。结果：IGF-Ⅱ能够对MMP-9蛋白分泌产生刺激作用，IGF-Ⅱ浓度不断增加的情况下其诱导作用也随之增强，随着浓度升高，MMP-9分泌量出现下降表现，但是IGF-Ⅱ对MMP-9基因表达水平不会产生明显影响。结论：IGF-Ⅱ能够对卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9分泌产生刺激作用，在卵巢癌侵袭及转移等过程中也可发挥一定的作用。
【关键词】胰岛素样生长因子-Ⅱ;卵巢癌细胞SKOV3;MMP-9表达的调节及其机制
【中图分类号】R737.31【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2019）12-03--02
基质金属蛋白酶为Ca2+及Zn2+依赖酶家族，明胶酶表达与卵巢癌侵袭及转移存在重要关联。特异性金属蛋白酶抑制因子（TIMPs）可有效阻断明胶酶活性，肿瘤恶性表型可能与TIMPs、MMP-S及MMP-9等动态平衡失调可能存在重要關联[1]。此次研究旨在分析IGF-Ⅱ对卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9表达的影响，如下：
1 资料与方法
1.1 临床资料
于含10%小牛血清的RPMI1640培养基中对SKOV3肿瘤细胞株进行常规培养，TIMP-1、MMP-9及β-catin引物由上海生物工程公司合成，PCR试剂盒产自SABC公司，AMV反转录盒产自Peptotech公司，IGF-Ⅱ产自Peptotech公司。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养
应用0.25%胰酶消化对数生长期卵巢癌细胞SKOV3中，在24孔板中接种1.5×105/ml浓度细胞悬液，1ml培养基/孔，每组均有4个复孔。在37℃环境下持续培育（48h），然后将上清弃除，应用无血清培养基进行清洗，然后将不含IGF-Ⅱ、含有10ng/ml、50ng/ml以及100ng/ml等不同浓度的IGF-Ⅱ加入其中，继续培养18h。收集细胞后将细胞总RNA提出出来并保存至-80℃冰箱内。收集细胞无血清培养上清液并通过离心处理将细胞碎片去除，然后放置于-20℃环境下保存[2]。
1.2.2 明胶酶谱法
分别配制5%浓缩胶及10%分离胶，将终浓度0.1%明胶加入分离胶中，阳性对照为HT-1080细胞上清液。应用细胞计数法对细胞培养上清液中的等总蛋白样品进行调整，然后将之置于样品槽中电泳，将2.5% TritonX-100溶液中加入凝胶并漂洗2次。在37℃恒温摇床及100ml明胶酶缓冲液中持续温育12-16h，采用0.1%考马斯亮蓝染色后再实施脱色处理，对负染酶带进行观察[3]。
1.2.3 RT-PCR法
待IGF-Ⅱ作用于细胞后应用异硫氰酸胍一步法实施总RNA提取操作，应用AMV反转录酶反转录总RNA，内参照为β-actin。
1.3 统计学分析
每组试验重复进行3次，应用Gel-analysis凝胶成像系统对试验结果进行分析，应用单因素方法分析法进行统计，P<0.05组间差异显著且有统计学意义。
2 结果
2.1 IGF-Ⅱ调节SKOV3培养上清液中MMP-9蛋白分泌情况分析
研究结果表明，10ng/ml、50ng/ml以及100ng/ml IGF-Ⅱ均能够使MMP-9表达得到增加，将不含IGF-Ⅱ的SKOV3培养液作为对比组并将MMP-9含量作为1，不同浓度下IGF-ⅡMMP-9增加比例为（47.79±2.51）%、（80.16±2.49）%、（75.01±4.19）%，与对比组相比可见显著差异，P<0.05。
2.2 IGF-Ⅱ对MMP-9表达影响分析
IGF-Ⅱ刺激细胞18h后进行细胞总RNA提取并进行反转录后，应用PCP扩增TIMP-1m RNA及MMP-9mRNA。不含IGF-Ⅱ刺激SKOV3后的MMP-9mRNA与β-actin mRNA比值为1.4871±0.0414，10ng/ml、50ng/ml以及100ng/ml不同浓度时比值分别为1.4901±0.0398、1.5049±0.0135、15154±0.0141，差异无统计学意义，P>0.05。
3 讨论
作为促有丝分裂原，IGF-Ⅱ可通过酪氨酸激酶途径加快肿瘤细胞转化及增殖。此次研究表明，不同浓度IGF-Ⅱ对MMP-9mRNA基因表达诱导作用不明显，IGF-Ⅱ不会导致MMP-9基因表达增加，表明IGF-Ⅱ对卵巢癌细胞SKOV3MMPs表达不会产生促进作用，IGF-Ⅱ可通过转录后蛋白调节增加卵巢癌细胞MMP-9分泌量[4]。综上所述，IGF-Ⅱ可刺激卵巢癌细胞SKOV3中MMP-9分泌，可促进卵巢癌肿瘤侵袭及转移。
参考文献：
田甜，梁霞，韩翠欣，陈咏梅，等.妊娠期高血压病患者胎盘组织中IGF-Ⅱ、IGFB P-1和抵抗素的表达及相关性分析[J].中国临床医学，2019，26（3）：477-481.
闫林萍，乌兰，钟天鹰，刘岚.胎盘长链非编码RNA CTD-2012K14.6异常表达致胎儿巨大的初步功能研究[J].中华内分泌代谢杂志，2019，35（2）：138-142.
李辉，刘丽伟.外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平及组织ER表达情况及与子宫肌瘤的相关性研究[J].实验与检验医学，2019，37（1）：44-47.
宁佩芳，高玉华，刘君，李奕.卵巢癌中IGF-Ⅱ、IGFBP-3的表达及其与临床病理特征的相关性研究[J].临床和实验医学杂志，2017，16（1）：26-29.
