潘恩山 李煜罡 陈锡钧
【摘 要】目的探讨益肾通瘀方对前列腺增生（BPH）大鼠的影响及作用机理。方法选取雄性SD大鼠30只，随机分为正常组、模型组、治疗组，每组10例。腹腔注射丙酸睾酮诱导大鼠前列腺增生，观察益肾通瘀方对BPH大鼠前列腺湿重和前列腺指数的影响，实时荧光定量PCR检测各组大鼠前列腺组织中miR-143、miR-145和miR-221相对表达水平。结果与正常组相比，模型组BPH大鼠前列腺湿重、前列腺指数及miR-143、miR-145和miR-221相对表达水平均显著增加（P<0.01）;与模型组相比，治疗组BPH大鼠前列腺湿重、前列腺指数及miR-143、miR-145和miR-221相对表达水平均显著下降（P<0.01）。结论益肾通瘀方治疗BPH可能与其能抑制miR-143、miR-145和miR-221表达有关。
【关键词】益肾通瘀方;良性前列腺增生;大鼠;miRNA表达
【中图分类号】R697【文献标识码】A【文章编号】1672-3783（2019）11-03--01
我们研究益肾通瘀方对BPH大鼠前列腺组织中miR-143、miR-145和miR-221表达的影响，研究如下。
1 材料与方法
1.1 材料益肾通瘀方由广州中医药大学第一附属医院制剂科提供。丙酸睾酮注射液购于广州白云山明兴制药有限公司。健康SPF级雄性SD大鼠由广州中医药大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：SYXK（粤）2018-0023。TRIzol试剂、miRNA逆转录试剂盒购于美国ABI公司;实时荧光定量PCR（qPCR）试剂盒及相应引物购于大连TaKaRa公司。
1.2 动物分组及处理方法雄性SD大鼠30只，体重280±20g，饲养于温度25±1℃、相对湿40%～70%环境，自由进食饮水。所有大鼠经适应性生长一周，随机分为正常组、模型组、治疗组（每组10只），编号并称重。正常组正常饲养，模型组和治疗组大鼠给予腹腔注射丙酸睾酮液原液（25mg/kg/d）进行BPH模型构建。连续注射21天，模型组蒸馏水灌胃治疗，治疗组采用前列通瘀方中药冲剂（按生药量0.4g/kg/d）灌胃治疗，各组大鼠于21天后处死并称量。分离前列腺，置于液氮中保存用于总RNA抽提。
1.3 前列腺湿重及前列腺指数检测大鼠经颈椎脱臼处死后分别称量体重，分离出前列腺，置于冰生理盐水中，小心去掉周围结缔组织及脂肪，称重并计算前列腺指数（前列腺指数=前列腺湿重mg/鼠体重g）。
1.4 qPCR检测miRNA表达Trizol法提取组织样品中总RNA，然后用miRNA逆转录试剂盒逆转录成cDNA，qPCR检测组织样品中miR-143、miR-145和miR-221相对表达。
1.5 统计学分析采用SPSS19.0统计软件进行数据分析，数据以平均数±标准差（x±s）表示，三组之间比较采用单因素方差分析，然后采用LSD检验分析组间差异。P<0.05表明差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 益肾通瘀方对BPH大鼠前列腺重、前列腺指数影响
与正常组比，模型组大鼠前列腺湿重和前列腺指数显著增加（P<0.01），表明模型组大鼠前列腺出现明显增生，BPH大鼠造模成功。与模型组比，治疗组大鼠前列腺湿重、前列腺指数显著降低（P<0.01），表明益肾通瘀方对BPH大鼠前列腺增生有显著治疗作用。见表1。
2.2 益肾通瘀方对BPH大鼠前列腺组织中miR-143、miR-145和miR-221表达的影响
与正常组比，模型组大鼠前列腺组织中miR-143、miR-145和miR-221相对表达水平显著增加（P<0.01）。与模型组比，治疗组大鼠前列腺组织中miR-143、miR-145和miR-221相对表达水平显著显著下降（P<0.01）。见表2。
3 讨论
本研究证实miR-143和miR-145在BPH大鼠前列腺中表达显著上升;而在经过益肾通瘀方治疗后的BPH大鼠前列腺中miR-143和miR-145表达显著降低，前列腺湿重、前列腺指数均降低。提示益肾通瘀方可以抑制BPH的大鼠前列腺中miR-143和miR-145表达，具有保护大鼠前列腺增生的作用。本研究發现在BPH大鼠前列腺组织中miR-221相对表达水平显著上升;而在经过益肾通瘀方治疗后的BPH大鼠前列腺中miR-221表达水平显著降低。表明益肾通瘀方可以抑制BPH的大鼠前列腺中miR-221表达，具有保护大鼠前列腺增生的作用。综上，益肾通瘀方治疗BPH可能与其能抑制miR-143、miR-145和miR-221表达水平相关。
参考文献
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