杨晓芳 王欣
【摘要】本文通过了解昌吉地区丙型肝炎基因分型的分布情况并探讨其临床意义，得出结论，昌吉地区丙型肝炎病毒基因型流行株为1b和2a型，其次为3b.3a，其中以1b型和2a为主，研究本地区HCV基因分型对HCV感染制定个体化治疗方案提供依据。
【关键词】丙型肝炎；基因分型分布特点；临床意义
【中图分类号】R512.63 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2017.11..01
丙型肝炎病毒（HCV）感染是引起全球肝炎，肝硬化，肝腹水，肝癌的重要因素之一，根据HCV基因型可以了解不同基因型和亚型的地理分布，明确病毒的种系发育和传播途径，由于不同的基因型对药物敏感程度不同，欧洲肝脏研究学会2013年HCV感染诊治指南中，各基因型HCV的治疗方案也有区别[1]，明确HCV的基因分型，有助于判读治疗的难易程度及制定抗病毒治疗的个体化方案。本文旨在初步了解昌吉地区丙型肝炎患者的病毒基因分布情况，并探讨其临床意义。
1 材料与方法
1.1 标本来源
选取2015年5月～2016年12月昌吉地区HCV确诊患者125例的外周静脉血血清，其中男67例，女58例，男性患者年龄20～79岁，女性患者年龄22～76岁，且排除其他类型肝炎病毒感染的病例。
1.2 主要仪器和试剂
7300型荧光实时定量PCR扩增仪为美国AB公司产品，HCV RNA基因检测试剂盒为广州达安基因有限公司提供。
1.3 方法
HCV基因检测：血清标本处理及逆转录，RNA的提取在200 uL血清标本中加入50 uL蛋白酶K，，加入200 uL病毒裂解液（已含Carrier RNA）振荡混匀，高速离心10 s（防止混匀时产生气泡），72度放置10 min，同时洗脱液置于-72度预热。加入250 uL，无水乙醇振荡混匀，将混合液全部吸入离心柱，12000 rpm离心1 min，将离心柱至新的收集管加入500 uL抑制物去除液，12000 rpm离心1 min，再将离心柱注入新的收集管，加入500ul去离子水，12000 rpm离心1 min，此步骤重复两遍，最后14000 rmp离心3 min，72度干浴2 min，在离心柱中加入30 uL洗脱液，静止1分钟，12000 rmp离心1 min，取HCV-RNA反应管若干，分别加入制备的RNA30ul瞬时离心，将各反应管放入PCR扩增仪中，按下列条件50度逆转录25 min，95度15 min预变性，然后按（94度30 s，55度40 s，72度45 s）45个循环扩增）
1.4 杂交反应
膜条进行编号，将纯化的产物用斑点反向杂交法进行雜交。严格按试剂盒要求进行操作。最后将膜条上显色的位点与试剂盒所给出的标准模板进行比对，确定HCV的基因型。
2 结 果
2.1 HCV基因型结果分析
125例HCV患者血清标本中，115例能检出HCV基因分型，检出率为92%，10例患者因病毒载量太低，无法进行基因分型检测，115例标本中检出5种基因型分别为1b、2a、3b、3a、6a，其中所占比例为1b 51.2%（64/125），2a 26.4%（33/125），3b为4.8%（6/125），3a 5.6（7/125），混合型的为三种1b+2a位2.4%，（3/125），2a+6a 0.8%（1/125），1b+2a 0.8%（1/125）。
2.2 HCV基因型的性别、年龄分布
对HCV基因不同组进行比较，基因1b64例其中男性28例占43.7%，基因2a为33例，其中男性占19例占57.5%。按年龄分组其中>50岁患者62例，≥50岁患者53例，进行组间比较，差异无统计学意义（P≥0.05）。
3 讨 论
丙型肝炎病毒在全球广泛流行，据最新统计，全球约1.7亿人感染丙肝，感染率为3%，每年新发HCV感染病例约为300万～400万[2]。人感染丙型肝炎病毒后比感染乙型肝炎病毒更容易转化成慢性肝炎，并可能发展成肝硬化和肝癌。HCV基因型的检测与HCV感染者抗病毒治疗的疗程，及预后等方面都有很大的相关性。HCV基因型的研究一直是丙型肝炎病毒研究的热点。近年来研究发现，在我国不同地区HCV基因也存在一定的差异性，我国的主要基因型为1b型，其次为2a型。混合型则主要在输血史及吸毒患者中相对多见[3]。本研究结果显示昌吉地区HCV存在5种基因型，5种基因型分别为1b、2a、3b、3a、6a，其中所占比例为1b 51.2%（64/125），2a 26.4%（33/125），3b 4.8%（6/125），3a 5.6%（7/125），混合型的为三种1b+2a为12.4%（3/125），2a+6a 0.8%（1/125），1b+2a 0.8%（1/125），有10例HCV患者因RNA含量低，外周静脉血未检出基因型。HCV基因型的性别，年龄进行组间比较，无统计学意义。不同基因型丙型肝炎患者的临床症状、疾病发展以及预后均存在一定差异，对HCV基因型的研究有助于了解丙型肝炎的危险因素，及肝脏疾病的进展情况，从而为疾病治疗方案的个体化制定提供依据。
参考文献
[1]曾劲峰，卢 亮，孙元璋，等.国产HCV-RNA分型试剂盒检测结果分析[J].国际检验医学杂志，2017，38（2）：157-159.
[2]耿 田.丙型肝炎病毒基因分型的检测方法及临床意义[J].海南医学院学报，2016，22（16）：1925-1928.
[3]冀 敏.丙型肝炎患者基因分型与抗HCV、HCV-RNA的相关性研究[J].实验与检验医学，2017，35（2）：48-49.
本文编辑：刘欣悦endprint
