沈静静 金国玺
【摘要】目的 探讨T2DM患者血清中PCSK9水平与血脂等动脉硬化危险因素之间的关系，以及动脉粥样硬化发病中PCSK9与IL-6、IL18等炎症因子是否存在相关性。方法 采用桥联ABC-ELISA夹心法检测60例T2DM患者和28例正常对照组血清中PCSK9水平以及IL-6、IL18的水平，同时对T2DM组血清PCSK9水平的相关因素行Person相关性分析。结果 2型糖尿病大血管病变组（B组）与2型糖尿病无血管病变组（A组）患者血清中PCSK9水平存在统计学差异（P<0.05）；2型糖尿病患者血清中PCSK9水平与TC、LDL-C、TG、FBG、SBG等存在显著正相关关系，且具有统计学意义（P<0.05）。2型糖尿病患者血清中PCSK9的表达与左侧颈总动脉IMT、右侧颈总动脉IMT、平均总动脉IMT、RCCA内径、RCCARI及LCCARI等均存在显著正相关关系（P<0.05），与RCCA V max、LCCA V max、RCCA V mix、RICA V mix等颈动脉粥样硬化相关性指标呈显著负相关关系（P<0.05）。PCSK9水平与IL-6、IL18等炎症因子存在显著正相关关系（P<0.05）。结论 2型糖尿病患者血清中PCSK9的表达增加，提示PCSK9可能在糖尿病大血管病变过程中起一定的作用，与IL-6、IL18共同作用加速糖尿病动脉粥样硬化的发生发展。
【关键词】PCSK9；动脉粥样硬化；炎症因子；IL-6；IL18
【中图分类号】R54 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2018.09..02
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2016～2017年住院及门诊T2DM组患者60例，男32例，女28例，其入选完全符合当前国际公认的糖尿病诊断标准，年龄32～76岁，平均（57.50±8.16）岁，然后依据他们是否合并糖尿病血管病变，再将其分为两组，一组是大血管病变组30例（B组，男14例，女16例）；另一组是无血管病变组30例（A组，男18例，女12例）。其中，符合大血管病变诊断的患者必須应最少满足以下一个标准：（1）心肌梗死或者有心绞痛或病史，并通过动态心电图和超声心动图等技术手段明确诊断的临床冠心病；（2）有脑血管意外病史，头颅CT或MRI扫描明确有缺血病灶；多普勒超声检查可见颈或双下肢动脉血管壁硬化斑块或血栓形成或动脉广泛不规则狭窄；下肢缺血性临床表现（间歇性跛行、缺血性疼痛、坏疽等）。正常对照组28例（男14例，女14例），为同期查体健康者，年龄36～67岁，平均（55.14±7.23）岁，空腹及餐后2 h血糖均正常。组间年龄、性别差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 临床资料
①临床资料收集：受试者经10 h过夜空腹，到医院休息20 min，测量血压、体重、身高、腰围、臀围，并行心电图、心脏彩超、双下肢、双颈动脉及脑血管彩色多普勒超声检查，包括右侧颈总动脉IMT（RCCA IMT）、右侧颈内动脉IMT（RICA IMT）、左侧颈总动脉IMT（LCCA IMT）、左侧颈内动脉IMT（LICA IMT）、平均总动脉IMT、RCCA内径、RICA内径、LCCA内径、LICA内径、右侧颈总动脉阻力指数（LICA RI）、右侧颈内动脉阻力指数（RICA RI）、左侧颈总动脉阻力指数（LCCA RI）、左侧颈内动脉阻力指数（LICA RI）、右侧颈总动脉最大血流速度（RCCA V max）、右侧颈内动脉最大血流速度（RICA V max）、左侧颈总动脉最大血流速度（LCCA V max）、左侧颈内动脉最大血流速度（LICA V max）、右侧颈总动脉舒张末期速度（RCCA V mix）、右侧颈内动脉舒张末期速度（RICA V mix）、左侧颈总动脉舒张末期速度（LCCA V mix）、左侧颈内动脉舒张末期速度（LICA V mix）等。②生化指标的检测：经12 h过夜空腹抽取肘前静脉血检测各种指标，包括血脂（生化比色法）、血糖（葡萄糖氧化酶法）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、糖基化血红蛋白（HbA1c）。③血清PCSK9水平的收集与测定：将全血样品放置于室温2小时或者在4℃温度下好过12小时后于1000×g离心20分钟，然后取上清检测，本实验中收集血液的试管必须满足以下两点：第一，无热原；第二，无内毒素，用抗人PCSK9抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的人PCSK9会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人PCSK9抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。④血清IL6、IL18水平的收集与测定：方法同PCSK9。
1.3 统计学分析
采用SPSS 17.0软件，计量资料以“x±s”表示，采用t检验；计数资料以例数（n）百分数（%）表示，采用x2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 T2DM各亚组与正常对照组各检测指标比较
T2DM无大血管病变组（A组）的血浆收缩压、FBG、TC、HDL、LDL、LDL-C、TG、HbA1c、PCSK9、IL-6、IL-18水平较正常对照组显著升高（P值分别为0.039、0.000、0.032、0.000、0.045、0.065、0.003、0.000、0.000、0.000、0.003）；T2DM合并大血管病变组（B组）的血浆收缩压、FBG、TC、HDL、LDL、LDL-C、TG、HbA1c、PCSK9、IL-6、IL-18水平较正常对照组显著升高（P值分别为0.002、0.000、0.002、0.000、0.002、0.002、0.003、0.002、0.000、0.000、0.000、0.000）；T2DM合并大血管病变组（B组）的血浆PCSK9、IL-6、IL-18水平较T2DM无大血管病变组（A组）显著性升高（P值分别为0.001、0.004、0.018）。
2.2 三组患者血清PCSK9水平
三组患者血清PCSK9水平与SBP、TC、LDL-C、TG、FBG等动脉粥样硬化的常见危险因素呈显著正相关关系，且差异有统计学意义（P<0.05），而与HDL呈显著负相关关系：三组患者血清PCSK9水平与一般指标的相关性分析（n=88）
2.3 2型糖尿病患者的血清PCSK9水平
2型糖尿病患者的血清PCSK9水平与右侧颈总动脉内中膜厚度（RCCA IMT）、右侧颈内动脉内中膜厚度（RICA IMT）、左侧颈总动脉内中膜厚度（LCCA IMT）、左侧颈内动脉内中膜厚度（LICA IMT）及平均总动脉内中膜厚度（MCA IMT）均存在显著正相关关（P<0.05），与RCCA内径、RICA内径、LCCA 内径、LICA内径、RICA Vmax 、LICA R I、RICA R I、LCCA RI等颈动脉粥样硬化相关性指标也呈显著正相关关系（P<0.05），与RCCA V max、LCCA V max、LICA V max、RCCA V mix、RICA V mix、LCCA V mix、LICA V mix等頸动脉粥样硬化相关性指标呈显著负相关关系。
2.4 2型糖尿病伴有大血管病变患者血清PCSK9水平
2型糖尿病伴有大血管病变患者血清PCSK9水平与IL6、IL18呈显著正相关关系（P<0.05），而2型糖尿病无大血管病变及健康组血清PCSK9水平与IL6、IL18无明显相关关系，见表1。
3 讨 论
本研究发现2型糖尿病患者的 PCSK9水平与IL-6、IL-18水平呈显著正相关关系。而糖尿病有大血管病变者PCSK9水平也比糖尿病无并发症组明显升高，提示PCSK9可能在糖尿病大血管病变过程中起一定的作用。其中有一些和炎症有关系的基因表达，如IL-17B、LCK、TNFRSuperfamilyMember 3及MKK6等处于PCSK9 基因的下游调控之列。功能获得型突变 D374Y-PCSK9 基因分析也表明PCSK9调节LDL时出现某些特殊炎症反应，可能与p38MAPK信号通路有关[3]。PCSK9 siRNA能够抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子IL-1α、IL-6和TNF-α表达，其机制与抑制NF-κB核位移有关，提示PCSK9可能参与了炎症反应的调节[4]。
参考文献
[1]蔺 洁.枯草溶菌素转换酶9基因新突变的发现及其功能初步研究[D].南华大学，2011.
[2]刘英晓，王 立，休双玲.IL-6与2型糖尿病大血管病变的相关性[J].中国老年学，2010，30（17）：2513-2515.
[3]高雁鸿，刘素筠.亚临床炎症胰岛素抵抗与2型糖尿病大血管病变相关性分析[J].中国药物与临床， 2005，5（1）：46-47.
[4]徐 莹，董 霞，徐同道，等.白细胞介素18与2型糖尿病大血管病变关系的研究[J]. 哈尔滨医科大学学报，2011， 45（2）：149-152.
本文编辑：吴宏艳
