JIA | 动物医学 精选文章

本期精选JIA 2020-2021年出版的动物医学研究相关文章，所有文章在ScienceDirect平台开放获取，点击文章题目可查看全文。

An improved scheme for infectious bursal disease virus genotype classification based on both genome-segments A and B

一种基于基因组A、B双节段的传染性法氏囊病病毒基因分型方法

本研究率先建立了一种兼顾IBDV基因组双节段特征的新的IBDV基因分型方法。在该分型系统中，基于A节段编码的VP2高变区核苷酸序列特征，IBDV被分为9个基因群（A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8和AII）；基于B节段编码的B-maker的核苷酸序列特征，IBDV被分为5个基因群（B1、B2、B3、B4和BII）；A2又被进一步分为4个亚群（A2a、A2b、A2c和A2d）。利用新的基因分型方法，传统的经典株、变异株、超强毒株和弱毒株分别被归类于基因群A1B1、A2B1、A3B2和A8B1。本研究中鉴定的IBDV新型变异株被归类为基因群A2dB1。本研究建立的IBDV基因分型方法，是一个灵活多样的开元系统，可用于现有毒株和新出现毒株的明确鉴定，将极大地方便IBDV的分子流行病学研究。

evaluation of a povidone-iodine and chitosan-based barrier teat dip in the prevention of mastitis in dairy cows

基于聚维酮碘-壳聚糖的乳头成膜药浴剂在预防奶牛乳腺炎中的应用

本研究旨在探究一种基于聚维酮碘-壳聚糖的乳头成膜药浴剂对奶牛乳腺炎的预防效果，主要包括以下几个方面：一、壳聚糖对奶牛乳腺炎致病菌抑菌效果的研究：利用最低抑菌浓度实验考察不同分子量壳聚糖（5，50，150，350 kDa）对六种常见乳腺炎致病菌的抑菌效果，结果显示50 kDa的壳聚糖对六种致病菌的抑菌效果最好，将其应用于下一步的药浴剂制备；二、壳聚糖添加量对成膜药浴剂抑菌性能的影响：利用药敏实验考察不同壳聚糖添加量（0.0, 0.5, 1.0, 1.5%）对六种常见乳腺炎致病菌的抑菌效果，结果显示含4%聚维酮碘及1%壳聚糖的成膜药浴剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、蜡样芽胞杆菌的抑菌效果要显著大于含4%聚维酮碘的成膜药浴剂（P<0.05）；三、成膜药浴剂临床效果研究-乳区实验：选取47头健康中国荷斯坦牛进行为期56天的乳区对比实验，奶牛左侧2个乳区后药浴使用含4%聚维酮碘及1%壳聚糖的成膜药浴剂，右侧2个乳区后药浴使用10%聚维酮碘。在试验开始时（0天）和第28、56天时采集奶样，进行乳成分和乳中体细胞数（Somatic Cell Count，SCC）测定，同时针对SCC高于200,000个/mL的奶样进行致病菌的分离鉴定。结果表明：左侧乳区和右侧乳区奶样在0、28、56天时SCC及乳成分等指标均无显著差异（P>0.05）。四、成膜药浴剂临床效果研究-牛群实验：选取139头健康中国荷斯坦奶牛进行为期56天的群体对比实验，其中对照组67头，实验组72头。对照组后药浴使用10%聚维酮碘，实验组后药浴使用聚维酮碘-壳聚糖成膜药浴剂。结果表明：56天时，实验组的隐性乳腺炎发病率比对照组降低了29% (P<0.05)。在实验组内，第56天的隐性乳腺炎发病率低于0天 (P<0.05)。此外，实验组和对照组奶样在0、28、56天时SCC、乳成分指标和临床乳腺炎发病率均无显著差异（P>0.05）。微生物分离鉴定实验结果表明基于聚维酮碘-壳聚糖的乳头成膜药浴剂可有效预防由肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和弗格森大肠杆菌引起的隐性乳腺炎。综上所述，含4%聚维酮碘及1%壳聚糖的成膜药浴剂预防奶牛隐性乳腺炎的效果要优于10%聚维酮碘，该研究为扩大壳聚糖在奶牛乳腺炎防治方面的应用，开发壳聚糖相关的绿色兽药产品提供了科学的理论依据。

Susceptibility breakpoint for cefquinome against Escherichia coli and Staphylococcus aureus from pigs

头孢喹肟对猪源大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的敏感性折点研究

本研究旨在建立头孢喹肟对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的野生型折点（wild-type cut-off, COWT）和药动/药效学折点（pharmacokinetic/pharmacodynamic, COPD），以期为临床细菌耐药性监测提供数据指导。采用微量肉汤稀释法测定2014至2018年期间广东省分离的210株猪源大肠杆菌和160株猪源金黄色葡萄球菌对头孢喹肟的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC），结果表明头孢喹肟对大肠杆菌的MIC50（能抑制50%细菌生长的最低药物浓度和MIC90（能抑制90%细菌生长的最低药物浓度）分别是0.06 μg mL-1和0.25 μg mL-1；对金黄色葡萄球菌的MIC50和MIC90分别是0.5 μg mL-1 和1 μg mL-1。统计学分析方法和ECOFFinder程序计算结果表明头孢喹肟对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的野生型折点分别为0.125 μg mL-1和2 μg mL-1。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对头孢喹肟的耐药率分别为11.9％和6.25％。基于5000次循环的蒙特卡洛计算结果显示在临床推荐给药剂量下（2 mg kg-1,每天给药2次，连续给药3天），头孢喹肟对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的药动/药效学折点值均为0.25 µg mL-1，表明在当前推荐剂量下可对MIC ≤ 0.25 μg mL-1的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌实现90％以上的有效治疗。当前的给药方案对金黄色葡萄球菌引起的感染不能取得理想的治疗效果，将头孢喹肟给药剂量调整为4.5 mg kg-1时，能对MIC90 = 1 μg mL-1的金黄色葡萄球菌引起的感染实现90%以上的有效治疗。本研究对于临床上头孢喹肟对猪源大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的耐药性监测和用药指导有重要意义。

Kaempferol inhibits Pseudorabies virus replication in vitro through regulation of MAPKs and NF-κB signaling pathways

山奈酚通过调节MAPKs 和 NF-κB信号通路抑制伪狂犬病毒的增殖

本研究旨在探究山奈酚在体外对伪狂犬病毒的抑制作用及其机制，为狂犬病的防控提供新的思路。以阿昔洛韦为阳性对照，用CCK-8法测定不同浓度山奈酚对PK-15细胞的毒性，计算半数毒性浓度（CC50）以及山奈酚对病毒所致细胞病变的抑制率，计算半数抑制浓度（IC50）。通过荧光定量PCR法测定山奈酚在病毒感染不同阶段（对细胞的保护作用和抗病毒吸附、穿入和复制）以及在感染后不同时间点（2、4、8和16 h）分别加入药物后对病毒复制的抑制活性。采用Western blotting 和荧光定量PCR法检测分别检测山奈酚对NF-κB和MAPKs信号通路的影响及其下游靶基因的转录水平的变化。山奈酚在PK-15细胞上的CC50和IC50分别是0.213和 0.026 mol L-1，其选择指数（SI）为8.33，抗病毒活性优于阿昔洛韦（IC50为0.055 mol L-1；SI为6.34）。作用方式研究表明山奈酚显著抑制病毒的穿入和复制阶段，与病毒组相比，病毒基因拷贝数分别减少了约4倍和30倍。山奈酚在病毒感染后16 h内加入均能显著抑制病毒的增殖，与病毒组相比，在病毒感染后2h加入，病毒基因拷贝数减少约15倍。山奈酚显著调节病毒感染导致NF-κB和MAPKs信号通路的激活及其下游靶基因MAPKs（ATF-2和c-Jun）和NF-κB （IL-1α，IL-1β和IL-2）的转录水平。山奈酚能显著抑制病毒感染，作用方式为抑制病毒的穿入和复制阶段，作用机制可能为调节NF-κB和MAPKs信号通路及其下游靶基因。

Detection of arboviruses in Culicoides (Diptera: Ceratopogonidae) collected from animal farms in the border areas of Yunnan Province, China

云南省边境地区养殖场库蠓及其携带虫媒病毒的调查

本研究对云南省边境地区5个县的7个养殖场库蠓的种类、丰度及携带的虫媒病毒进行了调查，结果表明，共采集到7个不同种的库蠓405只，具体丰度为: 荒川库蠓 (5.43%，22/405)，原野库蠓 (1.23%，5/405)，不显库蠓 (19.75%，80/405)，东方库蠓 (17.28%，70/405)，尖喙库蠓 (29.38%，119/405)，异域库蠓 (5.68%，23/405) 和日本库蠓 (21.23%，86/405)。其中，尖喙库蠓和日本库蠓的丰度分别为13.33%-44.87%和10.00%-46.83%，表明它们是边境地区养殖场中优势库蠓。采用PCR对采集的库蠓样品进行了蓝舌病毒、流行性乙型脑炎病毒、登革病毒、寨卡病毒、非洲猪瘟病毒和非洲马瘟病毒等主要虫媒病毒进行了检测，仅在云南腾冲县一个水牛养殖场采集的丰度最高的尖喙库蠓中检测出BTV-1，国内尚未发现相关报道。上述结果表明，尖喙库蠓可能是这些边境地区BTV传播的重要媒介，这尚待进一步的研究证实。总体而言，本研究调查了中越缅三国边境地区养殖场库蠓种类及库蠓携带虫媒病毒的情况，为我国边境地区库蠓与BTV防控提供了基础数据。

Analysis of DNA methylation of CD79B in MDV-infected chicken spleen

MDV感染鸡脾脏组织中CD79B基因的DNA甲基化分析

为了评估CD79B基因在MD中的作用，我们以前期构建的MDV攻毒群体所得到的肿瘤化的脾脏组织（Tumor spleen，TS）和对照群体的正常脾脏组织（Normal spleen, NS）为实验材料，通过Q-PCR检测了CD79B基因的mRNA表达。设计了两个方案（#20和#27号）检测CD79B基因的甲基化水平，这两个方案分别涵盖了CD79B基因5’侧翼至内含子1和内含子2至内含子3的区域。为了确定CD79B基因的甲基化水平是否参与调控mRNA表达量，我们将mRNA表达量与甲基化水平进行相关分析。实验结果表明，两个方案中CpG位点的平均甲基化水平在TS组高于NS组（P<0.05）, CD79B的mRNA表达水平在TS组低于NS组（P<0.01）。当比较每个CpG位点在两组中的差异发现，在两个方案的40个CpG位点中有6个在TS与NS之间具有显著的甲基化水平差异（P<0.05）。相关分析表明TS中#20的平均甲基化水平可以影响mRNA表达量（P<0.05），而其中具有显著差异甲基化的2个CpG位点的甲基化水平与mRNA的表达量不相关（P>0.05）。该结果表明，一个区域的平均甲基化水平（不是某个差异显著的CpG位点）与该基因的表达有关，提示该区域可能因整体甲基化水平的改变而影响到转录因子的结合进而影响基因表达。总的来说，我们发现MDV感染后CD79B基因表达的改变可能是由DNA甲基化水平改变所引起的。

Detection and characterization of Hepatitis E virus from commercial rabbit livers in Hebei, China

中国河北省屠宰兔的戊型肝炎病毒鉴定和特征研究

本研究从中国河北省的一个屠宰场收集了176份肝脏样本。RNA检测结果显示3份样本HEV- ORF2 检测阳性，占样本量的1.7%。序列分析表明，3株分离株具有较高的同源性(94.08% ~ 98.85%)，为 HEV基因3型。此外，免疫组化(IHC)检测HEV ORF2蛋白显示，131份肝脏样本阳性，占样本量的74.4%。肝脏组织病理学观察结果显示，H.E染色的组织病理学变化主要有肝细胞变性、坏死、淋巴细胞浸润、胆管上皮细胞增生、含铁血黄素沉着等。这些结果表明，在家兔中存在戊型肝炎病毒，但兔戊肝病毒(rHEV)的传染性及人兔跨种传播的潜在风险有待进一步研究。

Viricidal activity of several disinfectants against African swine fever virus

几种消毒剂灭活非洲猪瘟病毒的效果评价

本研究以表达eGFP重组非洲猪瘟病毒为指示病毒，通过体外细胞培养方法，模拟浸泡和喷雾方式，在室温条件下，观察消毒剂不同浓度、不同时间作用后是否产生可见荧光信号为标准，来判定病毒是否完全被消毒剂灭活。结果显示，模拟浸泡消毒方式，在室温条件下，碘酸混合溶液0.5%浓度，作用10分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；过硫酸氢钾复合粉0.25%浓度作用30分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；枸橼酸粉0.25%浓度作用30分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；二氯异氰脲酸钠粉0.125%浓度作用60分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；戊二醛癸甲溴铵溶液0.2%浓度作用60分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；癸甲溴铵溶液0.5%浓度作用60分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒。模拟喷雾消毒方式，在室温条件下，碘酸混合溶液0.5%浓度，作用10分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；过硫酸氢钾复合粉0.25%浓度作用60分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；枸橼酸粉0.5%浓度作用30分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；二氯异氰脲酸钠粉0.25%浓度作用60分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；戊二醛癸甲溴铵溶液0.2%浓度作用60分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒；癸甲溴铵溶液0.5%浓度作用60分钟能完全灭活非洲猪瘟病毒。这些结果表明，常用市售6种消毒剂，在实验室条件下，不同浓度和作用时间均能有效灭活非洲猪瘟病毒，本实验建立了一种应用表达eGFP重组非洲猪瘟病毒为指示病毒，快速准确评价消毒剂灭活非洲猪瘟病毒效果的方法，为非洲猪瘟的生物安全防控提供有力理论依据和技术支持。

Insights into African swine fever virus immunoevasion strategies

非洲猪瘟病毒免疫逃逸机制研究进展

本文总结了ASFV免疫逃逸蛋白和宿主细胞相互作用及拮抗宿主防御系统的的机制。ASFV编码多种蛋白逃逸宿主防御，包括：调控细胞凋亡、抑制炎症反应、拮抗干扰素的产生和功能发挥、抑制细胞自噬和抑制MHC-Ⅰ类分子的细胞膜表达等。其中，A179L是ASFV编码的Bcl-2同源蛋白，不仅能和BH3-only蛋白互作，抑制细胞凋亡，也能与内质网定位的Beclin-1互作，抑制细胞自噬；A224L和凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)同源，能够抑制Caspase-3的活性和NF-κB的激活，进而抑制细胞凋亡；EP153R是C-型凝集素同源蛋白，不仅能通过降低p53的活性抑制细胞凋亡，也能通过其凝集素结构域和MHC-Ⅰ类分子互作抑制MHC-Ⅰ类分子分泌和细胞膜定位；DP71L不仅能招募蛋白磷酸酶1对eIF2α去磷酸化从而恢复蛋白质的大量合成，也能通过抑制CHOP的表达抑制细胞凋亡；而E183L/p54则能通过和DCL8互作，从微管上置换下Bim-3，进而促进凋亡的发生；ASFV编码IκB样分子A238L能抑制NF-κB的活化，进而抑制下游促炎性因子的表达，并且能够抑制钙调磷酸酶的活性和NF-AT信号通路；L83L则能直接和IL-1β互作抑制其活性。ASFV还编码多种蛋白抑制干扰素(IFN)的产生和功能。MGF360和MGF505/530是重要的ASFV感染哺乳动物和软蜱的宿主决定因子和毒力基因，能够强烈地抑制干扰素的产生。其中，属于MGF505/530家族的A528R不仅能抑制干扰素的产生，还能阻断JAK-STAT信号通路抑制干扰素的功能发挥。而属于MGF360家族的A276R则只能抑制干扰素的产生，不能拮抗JAK-STAT信号通路，但其具体机制不详。I329L与TLR3同源，通过靶向TRIF接头分子抑制下游的IRF3和NF-κB的激活，进而抑制干扰素的产生。ASFV编码的毒力因子UK(DP96R)能够拮抗cGAS-STING信号通路，从而抑制干扰素的产生。对ASFV免疫逃逸机制的认识将为后续减毒活疫苗的研发和ASF防控奠定基础。

Protective efficacy of an H5/H7 trivalent inactivated vaccine produced from Re-11, Re-12, and H7-Re2 strains against challenge with different H5 and H7 viruses in chickens

We developed an H5/H7 trivalent inactivated vaccine by using Re-11, Re-12, and H7-Re2 vaccine seed viruses, which were generated by reverse genetics and derived their HA genes from A/duck/Guizhou/S4184/2017(H5N6) (DK/GZ/S4184/17) (a clade 2.3.4.4d virus), A/chicken/Liaoning/SD007/2017(H5N1) (CK/LN/SD007/17) (a clade 2.3.2.1d virus), and A/chicken/Guangxi/SD098/2017(H7N9) (CK/GX/SD098/17), respectively. The protective efficacy of this novel vaccine and that of the recently used H5/H7 bivalent inactivated vaccine against different H5 and H7N9 viruses was evaluated in chickens. We found that the H5/H7 bivalent vaccine provided solid protection against the H7N9 virus CK/GX/SD098/17, but only 50–60% protection against different H5 viruses. In contrast, the novel H5/H7 trivalent vaccine provided complete protection against the H5 and H7 viruses tested. Our study underscores the importance of timely updating of vaccines for avian influenza control.

Molecular detection of virulence genes in Campylobacter species isolated from livestock production systems in South Africa

This study was conducted to identify virulence associated genes in Campylobacter species isolated from livestock production systems in South Africa. A total of 250 fecal samples consisting of cattle (n=50), chickens (n=50), goats (n=50), sheep (n=50) and pigs (n=50) were randomly collected from livestock in Eastern Cape and KwaZulu-Natal provinces of South Africa between April and October 2018. The samples were analyzed for the presence of virulence genes in Campylobacter species using molecular PCR-based methods. It was found that 77 and 23% of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli respectively were isolated from all the livestock samples. There were positive significant (P<0.05) correlations amongst all the virulence genes that were investigated. Chisquare and Fisher’s exact tests were implemented to test for the effect of livestock species on the presence or absence of virulence genes. The study demonstrated that most of livestock species can potentially cause zoonotic infections and food poisoning due to the high prevalence of Campylobacter. The high prevalence of virulence genes highlights the significance of Campylobacter in livestock production systems in South Africa. This requires the implementation of one-health approaches to reduce the impact of foodborne and zoonotic diseases for the welfare of human and animal health.

A protective role of resveratrol against the effects of immobilization stress in corpora lutea of mice in early pregnancy

In the present study, we aimed to investigate a protective role for resveratrol against the effects of immobilization stress on corpora lutea (CL) of mice in early pregnancy. A total of 45 early-pregnant mice were divided into no immobilization stress (NIS) group, immobilization stress (IS) group, and immobilization and resveratrol treatment (IS+RES) group (n=15). Mice were immobilized in plastic tubes (50 mL) for 3 h per day during day 1 to 7 of pregnancy. In the IS+RES group, 5 mg kg–1 d–1 of resveratrol was administered just prior to application of stress. We analyzed apoptotic activity in CL by Western blotting analysis (WB), transmission electron microscopy (TEM), and immunohistochemistry (IHC). Serum progesterone levels were examined with radioimmunoassay (RIA). IHC results showed that the intensity of positive staining for Bax was increased, and for Bcl-2 was decreased in CL after IS, while resveratrol treatment reversed the positive staining for Bax and Bcl-2. WB revealed that immobilization stress up-regulated the expression of Bax and caspase-9, and down-regulated Bcl-2 expression, while resveratrol treatment attenuated the effects of immobilization stress on the expression of Bax, Bcl-2 and caspase-9. According to our TEM results, apoptosis as defined by chromatin condensation was found in CL after immobilization stress, while resveratrol inhibited the apoptosis. We also demonstrated that immobilization stress decreased progesterone concentrations and ovarian expression of StAR, while resveratrol restored the concentrations of progesterone and expression of StAR back to normal. These results indicated that immobilization stress induced luteal regression while resveratrol inhibited luteal regression, suggesting that resveratrol plays a protective role on corpora lutea of mice during early pregnancy.

The circulation of unique reassortment strains of infectious bursal disease virus in Pakistan

传染性法氏囊病病毒独特型重组毒株在巴基斯坦的流行

本研究针对巴基斯坦主要养禽地区（旁遮普省、信德省、俾路支省和首都伊斯兰堡），开展了IBDV的流行病学研究。之前报道的巴基斯坦IBDV毒株仅显示了A节段编码的VP2基因，在GenBank上未见到过其B节段编码的VP1基因。然而，IBDV的基因组分为A、B两个节段，单独的VP2基因是无法科学地反映IBDV的真实特征的。在本研究中，运用RT-PCR技术，对覆盖29个肉鸡场的36株IBDV进行了VP1和VP2基因代表区段的扩增、测序和分析。基因遗传进化树和同源率比较研究结果显示，本研究的全部36株巴基斯坦IBDV毒株的VP2基因属于IBDV超强毒（very virulent IBDV，IBDV），而VP1基因则独立于超强毒和非超强毒之外形成了独特分支，这类毒株属于独特型节段重组IBDV毒株（vv-A/Uniq-B）。与流行于中国、印度等国家的vv-A/Uniq-B型IBDV相比，巴基斯坦IBDV毒株形成一个独立的亚群，具有明显的地域特点。本研究首次证明，具有地域特点的独特的节段重组毒株（vv-A/Uniq-B）是巴基斯坦IBDV的重要流行毒株。本研究揭示了巴基斯坦IBDV毒株的分子特征，这对于IBD疫苗的科学选择和该病的有效防控具有重要意义。

Alphaherpesvirus-vectored vaccines against animal diseases: Current progress

动物α疱疹病毒载体疫苗研究进展

本文总结了重组动物α疱疹病毒构建方法、外源基因的引入和表达以及动物α疱疹病毒活载体疫苗免疫作用三个方面的内容，包括了最新的基因编辑技术、不同的构建策略及其优缺点、外源基因的选择、插入形式和位点等，并介绍了各种动物α疱疹病毒活载体疫苗的最新研究进展，旨在为新型动物α疱疹病毒活载体疫苗的研究和开发提供一定的参考。

Rapid detection of Pseudomonas aeruginosa by cross priming amplification

铜绿假单胞菌交叉引物恒温扩增快速检测方法的建立

本研究采用交叉引物恒温扩增技术原理，根据PA的特异性基因oprI，设计1组带有FAM和Biotin标记的交叉扩增引物组，配套使用核酸检测试纸条，通过对反应体系和条件不断优化，建立了可视化的PA交叉引物恒温扩增检测方法（PA-CPA），在62℃恒温扩增45 min即可，其灵敏度是常规PCR的100倍，且特异性强；用建立的PA-CPA方法、常规PCR以及细菌分离培养方法检测83份临床样本中的PA，结果CPA方法检测出13份（15.3%）阳性样品，PCR检测到11份（13.3%），分离培养检测到10份（12.1%）。该方法不需要PCR仪，仅一台水浴锅或金属浴即可完成DNA的扩增，使用密闭的核酸检测装置使结果判定直观、客观，且可有效避免气溶胶污染。综上所述，本研究建立的PA-CPA检测方法，具有应用于PA现场快速检测的潜力，为由PA感染所致疾病的诊断和防治提供了技术支撑。

Detection of antimicrobial resistance and virulence-related genes in Streptococcus uberis and Streptococcus parauberis isolated from clinical bovine mastitis cases in northwestern China

我国西北地区临床型奶牛乳房炎性乳房链球菌和副乳房链球菌的耐药性与毒力基因研究

本研究旨在调查分离自我国西北地区临床型奶牛乳房炎的乳房链球菌和副乳房链球菌的耐药性，并检测相应耐药基因和毒力基因的模式分布。用E-test方法检测乳房链球菌与副乳房链球菌的药物敏感性。用PCR方法检测乳房链球菌与副乳房链球菌相应的耐药基因和毒力因子。从326份奶牛乳房炎样品中共分离出27株目的菌株。副乳房链球菌（n=11）对红霉素表现出高度耐药，耐药率达90.9%，对四环素、氯霉素和克林霉素的耐药率分别为45.5%、36.4%和27.3%。乳房链球菌（n=16）对四环素和克林霉素耐药严重，耐药率分别为81.3% 和62.5%。然而，乳房链球菌和副乳房链球菌对氨苄西林均表现为敏感。乳房链球菌中最常见的耐药基因是tetM ，检出率达80.0%，其次是blaZ和ermB，检出率均为62.5%。然而，耐药基因tetM、blaZ和ermB在副乳房链球菌中的检出率分别仅为27.3%、45.5%和27.3%。此外，PCR试验结果显示，所有试验菌株均携带至少一种毒力相关基因。本研究中优势毒力基因模式为sua+pauA/skc+gapC+hasC，存在于22.2%的试验菌株中。其中，1株乳房链球菌携带7种毒力相关基因，为sua+pauA/skc+gapC+cfu+hasA+hasB+hasC模式。研究发现，超过59.3%以上的试验菌株携带4至7种毒力相关基因。本研究结果表明，分离自我国临床型奶牛乳房炎病例的乳房链球菌和副乳房链球菌分子特征具有多样性，并对奶牛养殖业常用的抗生素表现出高度耐药性。本研究获得的试验资料有助于人们更好地了解由乳房链球菌和副乳房链球菌引起的细菌性乳腺炎发病机制，这一试验结果将对多价疫苗的开发和研究以及乳房炎靶向预防控制措施的制定提供科学指导。

Mycoplasma leachii causes bovine mastitis: Evidence from clinical symptoms, histopathology and immunohistochemistry

临床症状、病理组织学以及免疫组织化学证明leachii支原体可导致牛乳房炎

将leachii支原体GN407株通过乳头管灌注的方式接种6头泌乳母牛的12个乳区，另12个乳区接种热灭活的leachii支原体培养物作为阴性对照。采用临床评估、病原学、病理学和免疫组织化学（IHC）等多学科方法，对leachii支原体引起奶牛乳房炎的致病性进行研究。从接种后的第3天到第9天，12个接种乳区均发生了轻度至重度的临床型乳房炎和乳腺组织的病理学改变，包括炎性细胞浸润和乳腺导管的结构破坏。采用IHC方法，在接种后第6天，可在接种乳区的乳腺上皮细胞中检测到leachii支原体抗原弱阳性信号，在接种后9天，可检测到强阳性信号。对照乳区在接种后第9天也发生了轻度的临床型乳房炎，并且在乳腺组织中也检测到了leachii支原体抗原的存在。整个试验期内，未进行任何接种的阴性对照牛一直正常，乳腺组织中也未检测到leachii支原体。结果表明，直接的病理学和免疫组织化学证据证明leachii支原体可导致牛乳房炎，这种炎症主要是由于病原入侵乳腺上皮细胞引起的结构破坏和炎性细胞浸润而导致的。

evaluating the efficacy of an attenuated Streptococcus equi ssp. zooepidemicus vaccine produced by multi-gene deletion in pathogenicity island SeseCisland_4

马链球菌兽疫亚种致病岛SeseCisland_4多基因缺失弱毒疫苗的构建及其免疫效果评价

本研究中利用同源重组的方法构建了SEZ致病岛SeseCisland_4的多基因缺失株（ΔSEZ）。与野生株细菌SEZ相比，ΔSEZ对小鼠的半数致死量（LD50）降低了52倍，并且ΔSEZ对上皮细胞的黏附能力下降了70%，说明基因缺失株ΔSEZ具有成为弱毒疫苗的潜力。在使用不同剂量的弱毒疫苗ΔSEZ免疫小鼠后发现，当ΔSEZ的剂量为102 CFU mL-1时可以引起小鼠体内有效的体液免疫反应，其抗体效价为1:12800，该研究结果说明102 CFU mL-1可能是弱毒疫苗ΔSEZ的最适免疫剂量。同时，被动免疫保护试验结果显示小鼠被动免疫该抗体可以有效保护小鼠抵抗野生株SEZ感染，存活率达到100%。主动免疫保护试验结果显示小鼠主动免疫102 CFU mL-1剂量的ΔSEZ可以有效保护小鼠抵抗其野生株SEZ以及其他强毒株SEZ的感染。体外细菌全血存活试验发现免疫ΔSEZ（免疫剂量为102 CFU mL-1）产生的抗体可以有效清除血液中的SEZ，且体内细菌全血存活试验结果显示皮下免疫ΔSEZ（免疫剂量为102 CFU mL-1）可以帮助小鼠加速清除野生株SEZ。此外，通过皮下免疫ΔSEZ的免疫方式在小鼠血液中没有检测到细菌。综上所述，用剂量为102 CFU mL-1的弱毒疫苗ΔSEZ可以给小鼠提供有效的保护效力并且在该剂量下弱毒疫苗ΔSEZ具有较好的安全性，表明ΔSEZ可以作为预防和治疗SEZ的疫苗候选菌株。

A rapid, simple, and sensitive immunoagglutination assay with silica nanoparticles for serotype identification of Pseudomonas aerugin

基于免疫二氧化硅纳米微球的鉴定铜绿假单胞菌血清型的快速、简便、敏感的凝集试验

本研究应用11种血清型的铜绿假单胞菌多次免疫新西兰白兔，获得了抗P. aeruginosa多克隆血清抗体，再经过各血清型菌株交叉凝集吸附试验，制备了P. aeruginosa 11种血清型的单因子血清。应用反相微乳液法制备二氧化硅微球，利用5种有机活性染料与11种血清型的单因子血清分别修饰二氧化硅微球制成免疫彩色二氧化硅微球，建立了用于P. aeruginosa血清型鉴定的新型凝集检测技术。研究结果显示，11种血清型的免疫彩色二氧化硅微球只与对应菌株在2 min内均出现明显的、不同颜色的凝集现象，相较于经典凝集试验更方便观察及判定，具有较高的特异性；待检P. aeruginosa菌液浓度在3.6×105 cfu ml-1 -3.6×1012 cfu ml-1之间均可被检出，其敏感性完全可以满足对培养菌的血清型鉴定；用4℃保存90d的免疫彩色二氧化硅微球进行凝集试验，凝集结果不发生改变，表明该方法具有一定的稳定性；本研究所建立的方法对临床分离样品的检测结果与试剂盒的检测结果的符合率为100%。由于在凝集体系中引入彩色二氧化硅微球，极大地增加了血清型抗原的检出效率，并且使原有的无色的凝集现象呈现出不同颜色，进一步提高了结果判定的准确性。本研究建立的方法具有特异、敏感和操作简便等特点，为临床铜绿假单胞菌的快速检测及其血清型的鉴定提供了新的方法。

Serologic and molecular survey for major viral pathogens in grazing hybrid wild boars in Northeast China

中国东北地区放养杂交野猪重要病毒病血清学和分子流行病学调查

杂交野猪，在中国也称特种野猪，是以野猪为父本，以家猪为母本进行杂交，经过选育驯化的一种二元野猪。其具有野猪的外貌特征，环境适应性强，饲养经济效益可观。在内蒙古自治区、吉林省和黑龙江省，特别是东北边境的山林地区，杂交野猪饲养普遍。杂交野猪通常在林地边缘放养，远离其他畜群，很少发生传染病，因而疫病免疫和监测往往被忽视，猪群中疫病感染情况不清楚。野猪是多种猪病和人兽共患病的宿主，杂交野猪放养过程中与野猪接触频繁，易造成疫病相互传播。为明确放养杂交野猪群体的健康状况，评估其向家猪、野猪、甚至人类传播疫病的风险，本研究针对中国东北地区的杂交野猪开展了非洲猪瘟病毒 (African swine fever virus，ASFV)、猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒 (porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪伪狂犬病毒 (pseudorabies virus，PRV)、猪圆环病毒2型 (porcine circovirus type 2，PCV2) 和猪日本脑炎病毒 (Japanese encephalitis virus，JEV) 感染的血清学及分子流行病学调查。2015年9月至2016年12月，从吉林省、黑龙江省及内蒙古自治区采集外表健康杂交野猪血液样品169份，脾脏样品61份。血清抗体ELISA结果显示，除非洲猪瘟病毒外，其他5种病毒均有感染，PCV2抗体阳性率最高 (不同猪场为87.2-100%)，个别猪场存在较高的猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒抗体阳性率，并存在猪日本乙型脑炎病毒感染。RT-PCR或PCR检测结果表明，除PCV2外，各病毒核酸均为阴性。血液样品及组织样品PCV2核酸阳性率分别为33.1% (56/169)和32.8% (20/61)。对测得的15条PCV2 ORF2序列的系统发育分析表明，感染的PCV2为PCV2a、PCV2b和PCV2d基因型，核苷酸和推导的氨基酸序列同源性分别为88.5-100%和88.1-100%。本研究首次针对中国东北地区放养杂交野猪开展6种重要病毒病血清学和分子流行病学调查，检测结果表明，除非洲猪瘟病毒外，各病毒都有感染，其中PCV2感染普遍。研究结果表明，上述疫病有经杂交野猪向家猪及野猪传播的风险，猪场及监管部门应重视杂交野猪的免疫、疫病监测及生物安全管理。尽管未检测到非洲猪瘟病毒感染，为防控该病及其他跨境疫病，应加强边境地区放养杂交野猪管理。

Generation of recombinant rabies virus ERA strain applied to virus tracking in cell infection

自发红色荧光重组狂犬病病毒的构建及其示踪感染的应用

本研究基于重组RABVEvelyn-Rokitnicki-Abelseth株(rERA)载体平台，构建了融合表达rERA核蛋白与红色荧光蛋白mCherry(N/mCherry)的重组RABV株rERA-N/ mCherry；rERA-N/mCherry自发红色荧光，并且具有与亲本株rERA相似的体外生长特性；N/mCherry基因的插入表达具有体外遗传稳定性，并且没有增加载体毒株的毒力；在激光共聚焦成像系统下成像，直接观察到rERA-N/mCherry株的吸附细胞并内吞的过程。与传统的荧光蛋白报告系统相比，本研究构建的重组RABV由于其自发红色荧光的特性，更适合成为开展RABV致病机制研究的优秀RABV模型，并对其它弹状病毒科病毒荧光报告系统的建立也具有一定的参考意义。

Baculovirus-expressed FAdV-4 penton base protein protects chicken against hepatitis-hydropericardium syndrome

杆状病毒表达的禽腺病毒4型五邻体基质蛋白对鸡的免疫效果评价

本研究使用杆状病毒表达系统表达五邻体基质蛋白和纤突蛋白2(fiber-2)。随后使用镍柱纯化五邻体基质蛋白和纤突蛋白2，这两个蛋白分别免疫或共同免疫14日龄SPF鸡，28日龄加强免疫一次。42日龄时，FAdV-4强毒株攻毒免疫组和攻毒对照组。结果表明，单独免疫penton base或免疫penton base+fiber-2，攻毒保护效率100%；免疫fiber-2攻毒保护率90%，攻毒对照组保护率10%。所有接种重组蛋白的鸡均可产生抗体，剖检和病理切片检查显示免疫组组织无明显损伤，而攻毒对照组心脏和肝脏有禽腺病毒血清4型感染的典型病变。因此，杆状病毒表达的penton base蛋白能够对FAdV-4强毒株攻毒提供保护，是防治肝炎心包积液综合征候选亚单位疫苗，具有良好的应用前景。本研究首次利用杆状病毒表达系统高效表达五邻体基质蛋白，并评价杆状病毒表达五邻体基质蛋白对鸡的免疫效果。大团聚体形成与周转是影响土壤有机质动态变化及稳定的关键因素，同时团聚体粒径分布也与微生物群落组成和活性密切相关。

Lactate dehydrogenase: An important molecule involved in acetamizuril action against Eimeria tenella

乳酸脱氢酶：一个沙咪珠利抗柔嫩艾美尔球虫的重要靶标分子

本研究旨在探讨新型抗球虫化合物沙咪珠利(acetamizuril)对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella，E. tenella)第二代裂殖子LDH(mz-LDH)的影响。分别采用了实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting、免疫荧光、酶活性测定等分子生物学手段检测了沙咪珠利对mz-LDH的影响。与对照组相比，沙咪珠利处理后mz-LDH的mRNA和蛋白表达均降低；免疫荧光结果表明，mz-LDH主要分布在E. tenella第二代裂殖子的核周或核内，且与对照相比，沙咪珠利处理组的mz-LDH免疫荧光强度明显降低，与Western blotting结果一致。与此同时，mz-LDH酶活性测定结果表明，与对照组相比，沙咪珠利处理组的E. tenella第二代裂殖子胞浆和胞核中的LDH酶活性均降低。此外，通过检测半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3)的活性来评价沙咪珠利对E. tenella第二代裂殖子的凋亡作用，发现沙咪珠利处理后，E. tenella第二代裂殖子caspase 3活性显著提高，表明沙咪珠利可能会诱导裂殖子的凋亡。上述研究表明，沙咪珠利可能通过抑制虫体的LDH表达来干扰虫体的能量代谢，同时，沙咪珠利也可能引起虫体细胞的凋亡。沙咪珠利是我国在研一类新兽药，其骨架来源于三嗪化合物，但活性高于现有三嗪类抗球虫药物-地克珠利，目前该药物抗球虫机制尚不明确。本研究中，我们首次研究了沙咪珠利对E. tenella第二代裂殖子LDH的影响，该研究的发现为阐明沙咪珠利抗E. tenella的作用机制提供了重要的理论依据，也为进一步筛选新的抗E. tenella药物奠定了提供了重要分子靶标。