切割质粒和含目的基因的外源DNA必须用同一种限制酶,这句话对吗?

不对,因为太绝对!一般情况下是用同一种限制性内切酶,这样暴露同样的黏性末端,然后用DNA连接酶进行连接。但是也存在不同的限制性内切酶切割形成相同的黏性末端。