microRNA的茎环引物及其PCR扩增的上游引物怎么设计?
microRNA的茎环引物及其PCR扩增的上游引物怎么设计?茎环引物设计时是单链序列,发这个序列给公司合成后,做实验时会自动成环吗?不需要特殊说明或加工,直接把这个单链序列发给公司就行吧?还有我看到一篇文献上,接下来PCR的上游引物除了包含microRNA的部分序列外,还在前面加了几个碱基,这个依据到底是什么呢?具体怎样设计这个上游引物呢?
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慈祥的睫毛膏
2026-04-04 18:15:30
合成的单链在实验时又一个和模板结合的退火过程,在这个过程中会自动形成茎环结构,如果你的茎环结构设计合理的话。我也在类似文献上看到过上游引物含有额外的碱基,上面有说明的,是为了调整Tm值。上游引物不能全覆盖miRNA,5‘-增加几个碱基后Tm值和下游引物相对应,可以再用软件检查,避免非特异性结合一般自己设计这种miRNA的RT-PCR引物需要不断优化,一次成功的机会较小,要做好心理准备。可以选择试剂盒
最新回答共有2条回答
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2026-04-04 18:15:30拼搏的斑马
回复合成的单链在实验时又一个和模板结合的退火过程,在这个过程中会自动形成茎环结构,如果你的茎环结构设计合理的话。我也在类似文献上看到过上游引物含有额外的碱基,上面有说明的,是为了调整Tm值。上游引物不能全覆盖miRNA,5‘-增加几个碱基后Tm值和下游引物相对应,可以再用软件检查,避免非特异性结合一般自己设计这种miRNA的RT-PCR引物需要不断优化,一次成功的机会较小,要做好心理准备。可以选择试剂盒
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