影响酶免疫组织化学技术的因素有哪些

免疫组化技术对于研究 肿瘤的发展规律,进行良恶性分类及鉴别诊断具有重要的作用。免疫组化染色的结果,与组织的固定、抗原的修复、抗体的保存及使用三个重要因素相关密切。1、 固定常用的组织固定液是甲醛,标本必须及时固定,这有利于抗原的保存,防止抗原在组织细胞内弥散、丢失或失去免疫活性,但固定时间最好为!" 小时,一般不超过"# 小时,因固定时间越长,部分组织细胞免疫组化标记敏感性会明显降低。其原因为甲醛固定过程中会形成醛键或羧甲基,而封闭了部分抗原决定簇；也会使蛋白与蛋 白之间发生交联,也可能会封闭抗原决定簇,使许多抗原如常用的$%、&$’( 等免疫反应明显减弱,甚至消失,致酶标不能得出正确的结果,因此在染色时为取得良好的染色效果,必须对有些抗原进行预先修复,以进一步暴露抗原。2、 修复抗原外检组织经过甲醛固定、脱水透明及浸蜡过程,组织中的抗原成分已被破坏或封闭,为了恢复组织的抗原性和提高组织对抗体的敏感性,一般需 修复抗原。有人用蛋白酶消化,或微波处理,或高压锅处理,使封闭的抗原成分暴露出来而显色。我们采用高温高压处理切片,切片在弱酸及高温高压下,使 封闭的抗原显示出来,提高了阳性检出率和阳性强度,同时减轻了背景着色,使阳性结果清晰可辨。当然,不同组织、不同抗原其所用的高压时间及选用合适的抗原 修复缓冲液及其最适的。’ 等均对结果影响甚大。我科一般采用+/+! 012 3 ( 柠檬酸钠缓冲液（。’ -/ +）作为抗原修复液,高温高压时间以!+ 045 显色效果最好,且几乎无脱片发生。实践证明,高压处理技术应用于免疫组织化学具有经济、简便、阳性率高、定位准确、染色清晰等优点,容易推广应用。3、 正确保存及使用抗体抗体是免疫组织化学最基本的试剂与材料,它可分为第一抗体与第二抗体,因为抗体是蛋白质构成,保存或使用不当,不但会造成浪 费,而试剂变质会出现假阴性结果。对抗体及6 , 7 试剂盒均应放置低温冰箱贮存,用一支取一支,对于一次用不完的抗体可保存在# 8冰箱内,而不要放在冰格室,因为那里的温度在+ 8以下,抗体会很快结冰,再次使用时又要溶解。这样几次冻融,抗体效价会急剧下降而失效。对一些将近失效期或已过失效期,有的适当提高工作浓度, 也可以作出正确的结果,以免丢失造成浪费。