用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗

我理解楼主的问题是这个样子。在连接之后的筛选其实是分两步的。第一步是筛选出含有载体标记基因的连接产物,这样的产物可能有载体-目的基因连接和载体-载体连接,利用的一般是载体上的标记基因的抗性培养（一般的标记基因是抗四环素或者是抗氨苄青霉素基因,只要用四环素或者是氨苄青霉素的培养基就可以了）。第二步是筛选出载体-目的基因,在上一步的培养基上挑菌,扩大培养之后,再接种的目的基因的培养基上,从而筛选出阳性克隆就可以了（这一步常用的、比较简单的方法就是蓝白板的筛选）。所以即使有载体-载体的连接物,也是会被在第二步筛选掉得。载体自连的概率其实不小,因为这是一个宏观统计的问题,况且一般的载体都要比目的基因大很多,楼主应该一想就会明白。所以在实验中一般采用的是用两种不同的内切酶处理切口,这样就限定了连接的顺序和方向,减少了无用的连接产物。楼主如果还有疑问还可追问,小的尽量帮忙解答。O(∩_∩)O~楼主加油! 再问： 很详细哈~那个阳性克隆能简单解释下么？ 再答： 恩~所谓阳性克隆就是可以表达的目的基因，这种筛选的方法就比较多了。我说的蓝白板只是其中的一种，这其中涉及到乳糖操纵子的内容，比较深，需要画图解释，我尽量让楼主明白吧。 乳糖操纵子是E。coli利用乳糖（galactose）的一种方式，主要有其中lacZ基因编码β-半乳糖苷酶的基因。在载体上设计上了lacZ的基因（如pBS载体，但是现在很少使用了），然后可以把目的基因插在lacZ的基因的C末端之后，然后只要lacZ表达了，目的基因也就表达了，因为二者共用一套的启动子结构。目的基因表达的就是阳性克隆。然后利用lacZ编码的β-半乳糖苷酶可以参与分解半乳糖，在IPTG的诱导下形成蓝色的菌落。挑这些蓝色的菌扩大培养就可以的，这些就是阳性克隆~ O(∩_∩)O~不知道我说的够不够清楚~ 楼主加油！