我在做PCR时,有好多的引物,Tm值在40-62之间,不知道用什么温度比较好.

不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少。在做PCR的时候,将退火温度设定的稍微低于Tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点。当然,做PCR有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能。一般来说,一直无法P出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前P出来过。那么检查下退火温度,多试几个温度。再就是Mg离子的浓度,模板不要太多。多尝试一下。总之,设定退火温度的时候略微比Tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了。