我要用CT法做荧光定量PCR,请问需要做标准曲线吗?关于浓度,是不是在反转录时将RNA浓度调一致?

最好是做标准曲线,要看看扩增效率的。调CDNA就还了~ 再问： 调CDNA和总RNA是一样的吧？反转录不是将总RNA都反转录成CDNA吗？ 再答： 不一样的，不能保证每管的反转录效果一致再问： 哦，直接测定cDNA浓度，然后定量时加入同等量的模板是吧？那能不能将做标准曲线的步骤详细说明一下呢？先在此谢过！！！ 再答： 调节一定量的模板的话是不现实的，不能保证每个都一样，不管你加入的量的多少，最终在计算的时候是通过内参基因的来校准的。 标准曲线是做模板的标准曲线？这个没做过，我做的都是相对定量的。 而检测引物扩征效率的话，就是将模板稀释10,100,1000,10000，看扩增效率就可以了，做完后有个曲线，看斜率，你可以网上搜一下引物扩增效率检测，也可以咨询试剂公司和仪器公司的技术支持