cDNA克隆,为什么没有文献用tttttttt作引物,而要在其他位置另找引物?
cDNA克隆,为什么没有文献用tttttttt作引物,而要在其他位置另找引物?如题,逆转录后为什么不继续用ttttttttttt做cDNA的PCR扩增的那一对引物之一?这样不是更简单吗
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很简单,因为用作逆转录的真核生物的mRNA有POLYA的尾巴,所以用Oligo dT做引物很容易,没有特异性,不用再麻烦设计引物,RNA本省就很不稳定,越快越好的。本身,你的想法很好,但是Oligo dT的Tm值太小了。不符合PCR接近72度的要求。不可能采用的,Oligo dT只能用在逆转录一个阶段的。
最新回答共有2条回答
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2026-04-03 12:24:38高贵的金鱼
回复很简单,因为用作逆转录的真核生物的mRNA有POLYA的尾巴,所以用Oligo dT做引物很容易,没有特异性,不用再麻烦设计引物,RNA本省就很不稳定,越快越好的。本身,你的想法很好,但是Oligo dT的Tm值太小了。不符合PCR接近72度的要求。不可能采用的,Oligo dT只能用在逆转录一个阶段的。
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