老师,我想做标准曲线验证一下扩增效率,知道rna的浓度,怎么换算成拷贝数,有人说起码要知道bp数,
老师,我想做标准曲线验证一下扩增效率,知道rna的浓度,怎么换算成拷贝数,有人说起码要知道bp数,我又不是做的质粒,就是提取标本的rna,然后想倍比稀释做一下曲线,这个bp又是谁的bp呢,ABI7300的标准品要输入拷贝数,我输入RNA的浓度可以吗
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你这个情况不需要知道拷贝数目。把样品等比例稀释,比如1:4,或者1:10。 至少做4-5个点。PCR后按照相对浓度和扩增的Ct值做曲线,就可以得到扩增效率了。
如果要知道拷贝数目,必须有已知浓度的含有该序列的质粒来作为批准品做标准曲线。
再问: 可是,老师,7300做曲线有一步需要输入浓度,我能直接输入RNA浓度吗单位是ng/ul,这个数值机器默认吗,平时看着他们都是输的拷贝数,如果扩增后根据ct值自己是不是也可以手工画曲线,我三种不同样本,但是检测同一个基因,每种标本还需要各自做曲线?
再答: 可以输入相对浓度,比如1, 0。5, 0。25。。。。 也可以根据CT值自己画曲线,用EXCEL 同一个基因只要做一次
如果要知道拷贝数目,必须有已知浓度的含有该序列的质粒来作为批准品做标准曲线。
再问: 可是,老师,7300做曲线有一步需要输入浓度,我能直接输入RNA浓度吗单位是ng/ul,这个数值机器默认吗,平时看着他们都是输的拷贝数,如果扩增后根据ct值自己是不是也可以手工画曲线,我三种不同样本,但是检测同一个基因,每种标本还需要各自做曲线?
再答: 可以输入相对浓度,比如1, 0。5, 0。25。。。。 也可以根据CT值自己画曲线,用EXCEL 同一个基因只要做一次
最新回答共有2条回答
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2026-04-07 00:00:50朴素的画笔
回复你这个情况不需要知道拷贝数目。把样品等比例稀释,比如1:4,或者1:10。 至少做4-5个点。PCR后按照相对浓度和扩增的Ct值做曲线,就可以得到扩增效率了。如果要知道拷贝数目,必须有已知浓度的含有该序列的质粒来作为批准品做标准曲线。 再问: 可是,老师,7300做曲线有一步需要输入浓度,我能直接输入RNA浓度吗单位是ng/ul,这个数值机器默认吗,平时看着他们都是输的拷贝数,如果扩增后根据ct值自己是不是也可以手工画曲线,我三种不同样本,但是检测同一个基因,每种标本还需要各自做曲线? 再答: 可以输入相对浓度,比如1, 0。5, 0。25。。。。 也可以根据CT值自己画曲线,用EXCEL 同一个基因只要做一次
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