题文
“基因靶向”技术，指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某项特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程，请回答有关问题：
(1)获取目的基因。
①经过修饰使靶基因的功能改变或丧失就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以根据此蛋白的结构及功能进行X酶基因的改造，这一技术叫做___________。
②为了提高实验成功率，需要通过_________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
(2)构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有________基因，以便于细胞的筛选。质粒具有的一至多个__________位点，使目的基因插入其中成为可能，因此常被选作运载体。
(3)将基因表达载体导入ES细胞，并从中筛选，然后培育出小鼠。
①由ES细胞培育出小鼠的过程中，主要应用了________技术和________技术。
②为了确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组，可通过观察小鼠的性状来检测，这属于________水平的鉴定。
③获得胚胎干细胞(ES细胞)。实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有_________。请举出一例获取ES细胞的常用方法：_____________。
(4)上述基因工程过程中，属于核心步骤的是____________。
题型：未知 难度：其他题型
答案
(1)①蛋白工程；②PCR
(2)标记；限制酶切割
(3)①早期胚胎培养；胚胎移植②个体③全能性；从早期胚胎(囊胚内细胞团)中分离，从胎儿的原始性腺中分离、通过核移植技术培育得到(任答一例)
(4)构建基因表达载体
解析
考点
据考高分专家说，试题““基因靶向”技术，指的是应用DNA.....”主要考查你对 [体外受精和早期胚胎培养 ]考点的理解。
体外受精和早期胚胎培养
体外受精与胚胎的早期培养：
1、体外受精的原理：人工模拟体内环境（包括营养、温度、pH等），使初级卵母细胞成熟和精子获能，最
终完成受精和胚胎保存。
2、体外受精主要操作步骤
（1）卵母细胞的采集和培养：
方法一：对小型动物一般用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后，从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。
方法二：对大型动物是借助超声波探测仪、腹腔镜等直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞，在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精（或从刚屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞）
（2） 精子的采集和获能：在体外受精前，要对精子进行获能处理。
采集方法：假阴道法、手握法和电刺激法等。
获能方法：培养法和化学法。
（3） 受精：获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。
3、胚胎的早期培养：
（1）培养目的：精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。
（2）培养液成分：除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清等物质。
（3）当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同。（牛、羊一般要培育到桑椹胚或囊胚阶段才能进行移植，小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植，人的体外受精胚胎可在4个细胞阶段移植）。
知识拓展：
1、早期胚胎是指可用于移植的胚胎，在原肠胚之前的囊胚、桑椹胚甚至更早的阶段。
2、受精后形成的受精卵需经早期发育培养，才能完成植入或着床。
3、胚胎早期培养液成分与动物细胞培养液成分基本相同，除无机盐、营养成分和调节物质外，还需要血清、抗生素等，两者都是液体培养基，但植物组织培养为固体培养基，其中加入琼脂，所需植物激素主要是生长素和细胞分裂素两大类。
