题文
香蕉原产于热带地区，是我国南方重要的经济作物之一。广东省冬季常受强寒潮和霜冻影响，对香蕉生长发育影响很大。由香蕉束顶病毒(BBTV，单链环状DNA病毒)引起的香蕉束顶病，对香蕉产生的危害十分严重。当前香蕉栽培品种多为三倍体，由于无性繁殖是香蕉繁育的主要方式，缺少遗传变异性，因此利用基因工程等现代科技手段提高其种质水平，具有重要意义。请根据上述材料，回答下列问题。
(1)简述香蕉大规模快速繁殖技术的过程。_____________________________。
(2)脱毒香蕉苗的获得，可采用__________的方法，此方法的依据是___________和___________。
(3)建立可靠的BBTV检测方法可以监控脱毒香蕉苗的质量，请问可用哪些方法检测病毒的存在？_________________(列举两种方法)。
(4)在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因可以从这些鱼的DNA中扩增得到。试述在提取和纯化DNA时影响提纯效果的因素及其依据。___________________(列举两点)。
(5)如何利用afp基因，通过转基因技术获得抗寒能力提高的香蕉植株？在运用转基因香蕉的过程中，在生态安全方面可能会出现什么问题？________________(列举两点)。
(6)从细胞工程的角度出发，简述一种培育抗寒香蕉品种的方法及其依据。__________________。另外，抑制果胶裂解酶的活性可以延长香蕉果实储藏期，请描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。__________________。
题型：未知 难度：其他题型
答案
(1)选取香蕉外植体，通过诱导脱分化产生愈伤组织，然后通过调整植物激素比例，使其再分化形成芽和根，获得大量试管苗(或通过诱导形成大量胚状体，制成人工种子，适宜条件下萌发长成幼苗)。
(2)茎尖(分生组织)组织培养 茎尖不带病毒(或病毒在植物体内分布不均匀) 植物细胞全能性
(3)①．BBTV病毒基因的检测(DNA分子杂交技术)；
②．BBTV病毒蛋白的检测(获得抗血清，利用抗原一抗体的杂交反应，判断病毒是否存在)。
(4)(答出两点即可)
①．选择NaCl溶液的合适浓度，利用DNA和其他杂质在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性，达到分离目的；
②．加入一定量酒精，使部分蛋白质杂质溶解于酒精，与DNA分离；
③．加入蛋白酶，除去蛋白质杂质的干扰；
④．控制DNA提取的温度，使大多数蛋白质杂质变性。
(5)(答出两点即可)
将afp基因插入土壤农杆菌的质粒，构建表达载体，通过农杆菌的转化导入香蕉受体细胞，成功转化的香蕉细胞通过组织培养形成植株。生态安全问题包括：
①．外源基因扩散到其他物种(外源基因漂移)；
②．转基因植株扩散影响生态系统的结构和功能；
③．转基因植株扩散对生物多样性的影响；
④．转基因植物残体或分泌物对环境的影响。
(6)体细胞杂交育种，其依据是将不同品种的香蕉体细胞利用细胞融合技术融合成杂种细胞后培育出抗寒香蕉品种(或体细胞诱变育种，其依据是利用诱变剂等方法使香蕉离体培养细胞发生基因突变，然后筛选培育出抗寒品种)。
蛋白质工程方法的步骤为：
①．果胶裂解酶蛋白的功能分析；
②．果胶裂解酶蛋白的结构预测和设计；
③．果胶裂解酶基因的改造。
解析
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考点
据考高分专家说，试题“香蕉原产于热带地区，是我国南方重要.....”主要考查你对 [蛋白质工程的崛起 ]考点的理解。
蛋白质工程的崛起
蛋白质工程的崛起：
1、蛋白质工程的概念
蛋白质工程：指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）。
2、蛋白质工程崛起的缘由：基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质。
3、蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构，又称为第二代的基因工程。
4、基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）。
5、蛋白质工程的步骤：
蛋白质工程和基因工程的不同：
项目蛋白质工程基因工程区别原理中心发展的逆推基因重组过程预期蛋白质供能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列→合成DNA→表达出蛋白质获取目的基因→构建基因表达载体→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定实质定向改造或生产人类所需蛋白质定向改造生物的遗传特性，一伙的人类所需的生物类型或生物产品（基因的异体表达）结果生产自然界没有的蛋白质生产自然界已有的蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程基础上延伸出的第二代基因工程，因为是对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，所以必须通过基因修饰或基因合成实现
知识拓展：
1、设计中的困难：如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列。
2、蛋白质工程和基因工程的区别：将目的基因导入受体细胞；基因工程合成的是天然存在的蛋白质，蛋白质工程合成的可以是天然不存在的蛋白质；蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程。 蛋白质工程从分子水平对蛋白质进行改造设计，通过对相应的基因进行修饰加工甚至人工进行基因合成，从而对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质以满足人类生产和生活需求。而基因工程只是将外源基因导入另一生物体内，并使之表达，体现人类所需的性状，或者获取所需的产品。因此，基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。
