题文
T-DNA可随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植株形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌(其中的T-DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子(称为T1代)。
(1)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除_____，因为后者产生的____会抑制侧芽的生长。
(2)为筛选出已转化的个体，需将T1代播种在含_____的培养基上生长，成熟后自交，收获种子(称为T2代)。
(3)为筛选出具有抗盐性状的的突变体，需将T2代播种在含____的培养基上，获得所需个体。
(4)经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与____植株进行杂交，再自交____代后统计性状分离比。
(5)若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性____。
(6)根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是：提取__________植株的DNA，用限制酶处理后，再用__________将获得的DNA片段连接成环(如下图)，以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_________作为引物进行扩增，得到的片段将用于获取该基因的全序列信息。
题型：未知 难度：其他题型
答案
(1)顶芽 生长素
(2)(一定浓度的)除草剂
(3)(一定浓度的)盐
(4)野生型 1
(5)降低
(6)突变体 DNA连接酶 B、C
解析
该题暂无解析
考点
据考高分专家说，试题“T-DNA可随机插入植物基因.....”主要考查你对 [多聚酶链式反应扩增DNA片段 ]考点的理解。
多聚酶链式反应扩增DNA片段
多聚酶链式反应扩增DNA片段：
1、PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
2、PCR反应过程是：变性→复性→延伸
过程说明图解变性当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链复性温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
延伸72℃左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5'端向3'端延伸
3、结果：上述三步反应完成后，一个DNA分子就变成了两个DNA分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。
细胞被DNA复制与PCR技术的比较：
细胞内DNA复制体外DNA扩增（PCR）不同点解旋在解旋酶作用下边解旋边复制80～100℃高温解旋，双链完全分开酶DNA解旋酶、DNA聚合酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA、RNA温度体内温和条件高温相同点①需提供DNA模板
②四种脱氧核苷酸为原料
③子链延伸的方向都是从5'端到3'端
知识点拨：
1、DNA分子复制的人工控制
解开螺旋：在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。
恢复螺旋：在50～60℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。
复制条件：缓冲液，DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、两种引物。
控制仪器：PCR仪（温度周期性自动调节仪）。
2、PCR的含义是多聚酶链式反应。
3、PCR技术反应的条件：①稳定的缓冲溶液环境；②DNA模板；③合成引物；④四种脱氧核甘酸；⑤DNA聚合酶；⑥温控设备
4、PCR技术最突出的优点是快速、高效、灵活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特点是：耐高温。
知识拓展：
1、DNA含量的测定——分光光度法
项目说明原理DNA在260nm的紫外线波段有一强烈吸收峰，峰值大小与DNA的含量是正相关过程稀释2μLPCR反应液，加入98μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释对照调零以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的赌注调节至零测量取DNA稀释液100μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值计算DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的读数）×稀释倍数2、DNA聚合酶不恩能够从头合成DNA，只能从DNA的3'端开始延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。
