题文
请回答基因工程方面的有关问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_______。
②在第_______轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
(3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为__________。(4)用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1kb 即1000个碱基对)，请在直接在下图的质粒上画出EcoRⅤ、MboⅠ的切割位点。
题型：未知 难度：其他题型
答案
(1)①15/16；②三
(2)①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效；②引物I’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效
(3) DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上
(4)见下图
解析
该题暂无解析
考点
据考高分专家说，试题“请回答基因工程方面的有关问题： (.....”主要考查你对 [多聚酶链式反应扩增DNA片段 ]考点的理解。
多聚酶链式反应扩增DNA片段
多聚酶链式反应扩增DNA片段：
1、PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
2、PCR反应过程是：变性→复性→延伸
过程说明图解变性当温度上升到90℃以上时，双链DNA解聚为单链复性温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合
延伸72℃左右时，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新链由5'端向3'端延伸
3、结果：上述三步反应完成后，一个DNA分子就变成了两个DNA分子，随着重复次数的增多，DNA分子就以2n的形式增加。PCR的反应过程都是在PCR扩增仪中完成的。
细胞被DNA复制与PCR技术的比较：
细胞内DNA复制体外DNA扩增（PCR）不同点解旋在解旋酶作用下边解旋边复制80～100℃高温解旋，双链完全分开酶DNA解旋酶、DNA聚合酶TaqDNA聚合酶引物RNADNA、RNA温度体内温和条件高温相同点①需提供DNA模板
②四种脱氧核苷酸为原料
③子链延伸的方向都是从5'端到3'端
知识点拨：
1、DNA分子复制的人工控制
解开螺旋：在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。
恢复螺旋：在50～60℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。
复制条件：缓冲液，DNA模板、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶、两种引物。
控制仪器：PCR仪（温度周期性自动调节仪）。
2、PCR的含义是多聚酶链式反应。
3、PCR技术反应的条件：①稳定的缓冲溶液环境；②DNA模板；③合成引物；④四种脱氧核甘酸；⑤DNA聚合酶；⑥温控设备
4、PCR技术最突出的优点是快速、高效、灵活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特点是：耐高温。
知识拓展：
1、DNA含量的测定——分光光度法
项目说明原理DNA在260nm的紫外线波段有一强烈吸收峰，峰值大小与DNA的含量是正相关过程稀释2μLPCR反应液，加入98μL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释对照调零以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的赌注调节至零测量取DNA稀释液100μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值计算DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的读数）×稀释倍数2、DNA聚合酶不恩能够从头合成DNA，只能从DNA的3'端开始延伸DNA链，因此DNA复制需要引物。
