题文
下面是某同学做自生固氮菌分离实验的方案和观察结果：
培养基成分：NaNO3：2g；K2HPO4：1g；KCl：0.5g；MgSO4：0.5g；FeSO4：0.01g；蔗糖：30g；琼脂：15g～20g；蒸馏水：1000mL。
A．实验目的：略。
B．实验材料和用具：略。
C．实验方法和步骤：
(1)接种：
①接种前，准备好上述配方的培养基，放入培养皿中并灭菌，供实验用。
②取10g土壤，放在无菌研钵中，注入5mL蒸馏水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。
③将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。将培养皿盖轻轻放在桌面上，手拿培养皿。将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环蘸取少许泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15～20处。
④接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上。
(2)培养：将接过种的培养皿放人恒温箱内，在28℃~30℃的温度下培养3d～4d。
(3)观察：3d～4d后，取出培养皿，仔细观察培养基上的菌落，其中大而扁、边缘呈现波状或锯齿状并为褐色的菌落为自生固氮菌。
(4)镜检：略。该实验方案和观察结果中有几处明显错误，请指出错误并改正。(至少找出三处)
题型：未知 难度：其他题型
答案
Ⅰ．培养基的配方中含有氮源是错误的，应将NaNO3改为不含N的钠盐；
Ⅱ．实验步骤接种②中用蒸馏水是错误的，应改为无菌水；
Ⅲ．实验步骤接种③中将培养皿盖放在桌面上是错误的，应改为略微打开培养皿盖；
Ⅳ．实验步骤接种④中没有写实验内容、接种人的姓名和接种日期，应在接种步骤④的后面加上“并在皿盖上写明实验内容、接种人的姓名和接种日期”；
Ⅴ．实验步骤观察中“仔细观察培养基上的茵落，其中大而扁、边缘呈现波状或锯齿状并为褐色的茵落”是错误的，应改为“仔细观察培养基上稀泥浆周围出现的黏液。黏液初为无色透明，以后为乳白色，最后变为褐色”。
解析
该题暂无解析
考点
据考高分专家说，试题“下面是某同学做自生固氮菌分离.....”主要考查你对 [土壤中微生物的分离与计数 ]考点的理解。
土壤中微生物的分离与计数
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：
1．分离菌株的思路
(1)自然界中目的菌株的筛选
①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。
(2)实验室中目的菌株的筛选
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度.pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。
2．统计菌落数目的方法
(1)稀释涂布平板法（间接）
①当样品的稀释庋足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
(2)利用显微镜直接计数
3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
4．实验流程
土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定
知识拓展：
1、Taq细菌是耐高温的微生物。
2、培养基对微生物具有选择作用。配置培养基时根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求，加入某些物质或出去某些营养物质，一直其他微生物的生长，也可以根据某些微生物对一些物理、化学因素的抗性，在培养基中加入某种化学物质，从而筛选出待定的微生物。这种培养基叫做选择培养基。
3、测定微生物数量的方法：
①直接计数法：常用显微镜直接技术法，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
②间接计数法：常用稀释平板计数法，平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。4、通常用来作为菌种鉴定的重要依据的是菌落。
