革兰氏染色步骤:革兰氏染色的关键步骤是什么

1.革兰氏染色的关键步骤是什么

酒精脱色为整个流程最关键的一步。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。（2）草酸铵结晶紫染1分钟。（3）自来水冲洗，去掉浮色。（4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。（5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精脱色为整个流程最关键的一步。（6）用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。扩展资料染色原理：该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低。故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。参考资料来源：百度百科-革兰氏染色法

2.简述革兰氏染色的步骤和结果

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物。它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。扩展资料阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同pH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，阴性菌则相反。所以染色时的染色液pH和染色时间等条件要严格控制。在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多。

3.什么是革兰氏染色法？主要步骤是？关键步骤？

一、革兰氏染色法不少于两种染料参与的染色方法称之为复染法，革兰氏染色法属于复染法类的一种染色方法。由结晶紫、碘液、番红参与，通过染料对细菌的细胞壁的着色，来区分革兰氏阴性菌与阳性菌的一种方法。取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。（2）初染。滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min，用碘液冲去残水，（4）脱色。用滤纸吸去玻片上的残水，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至流出的乙醇无紫色时，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节：脱色不足，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。因而脱色时间一般为20-30s。（5）复染。用番红液复染约2min，菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。革兰氏染色的原理结晶紫（C25H30ClN3）当中的CL-与I-发生氧化还原反应生成不溶于水的蓝紫色复合物（C25H30lN3）。革兰氏阳性菌细胞壁较厚且肽聚糖网层次多而交联致密，进行脱色时，因失水反而使网孔缩小，再加上结构中不含类脂，所以脱色处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内。

4.革兰氏染色的详细步骤

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。（5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。酒精脱色为整个流程最关键的一步。（6）用蕃红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性。

5.革兰染色的实验步骤

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，1、涂片固定。2、草酸铵结晶紫染1分钟。4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。用吸水纸吸去水分。并轻轻摇动进行脱色，吸去水分。7、蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。镜检。革兰染色反应的原理：革兰染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。革兰染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色。

6.革兰氏染色的机制和方法

革兰氏染色法革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，这是染色反应的主要依据。阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，易脱色。所以脱色时间，革兰氏染色原理：G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，乙醇将脂溶解，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。

7.革兰氏染色的步骤和原理

革兰氏染色的步骤和原理如下:1、首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。将载玻片在火焰上方固定。加路哥式碘液大概一滴，注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。