tbst:western blot中，封闭液封闭完成后，需要用PBS或PBST洗涤滤膜，然后进行一抗孵育

1.western blot中，封闭液封闭完成后，需要用PBS或PBST洗涤滤膜，然后进行一抗孵育

一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体，只有洗干净非特异性结合在膜上的一抗，加二抗时才不会因非特异结合而呈现很重的背景。

2.免疫组化中能否用TBST代替PBS使用？

完全可以采用TBST溶液来代替PBS，这样洗涤效果更佳！

3.western牛奶封闭液怎么配

TBS缓冲液（100mmol/L Tris•L NaCl） 1 mol/LTris•

4.tbst大概要用多少浓盐酸调ph

TBS缓冲液（100mmol/ L Tris•HCl pH7.5,150mmol/L NaCl） 1 mol/ LTris•HCl（pH7.5） 10ml NaCl 8.8g 蒸馏水至 1000ml TBST缓冲液（含0.05％Tween20的TBS缓冲液） 20％Tween20 1.65ml TBS 700ml 混匀后即可使用，最好现用现配。

5.TBST配方

先称量NaCl40g，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl47.6g，倒入刚才的那个烧杯中（PS：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量。

6.做western时TBST和PBST是一个东西么？

Dissolve the following in 800ml of distilled H2O 8.8 g of NaCl 0.2g of KCl 3g of Tris base Add 500ul of Tween-20 Adjust the pH to 7.4 Add distilled H2O to 1L Sterilize by filtration or autoclaving Tween-20 【性状】聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物。【作用与用途】为司盘和环氧乙烷的缩合物，由于其分子中有较多的亲水性基团一聚氧乙烯基，为一种非离子型去污剂。常作为水包油（O/W）型乳化剂；可与其他乳化剂如月桂醇硫酸钠或司盘类合用，能增加乳剂的稳定性。也可作某些药物的增溶剂。Tween-20有复性抗原的作用，用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点可以降低抗体的非特异性结合。封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标委、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和Tween-20（0.05 - 0.1%）稀溶液。Tween 和同类型的Triton X-1OO(聚乙二醇辛基苯基醚)非离子型去污剂在乳化蛋白时，不破坏蛋白的结构，可减少对蛋白质之间原有的相互作用的破坏。离子型去污剂如SDS则破坏蛋白的结构。

7.做western的时候，用TBST洗一抗，可是配TBS的时候，忘记调PH了

pH值是影响抗原-抗体结合的重要因素。相比之下，pH值偏高比偏低对抗体结合的影响小。