质粒构建:为什么构建质粒

1.为什么构建质粒

质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。

2.重组质粒构建的注意事项？

重组质粒构建是常用的分子生物学手段，其实只是最基本的方法，一般一个星期同时构建三二个组质粒是没有问题的。但是其中还是有些基本的技巧需要掌握。让大家在实验中少走弯路。1) 克隆基因的酶切位点问题 2) 载体酶切的问题 3) 连接片段浓度比的问题 在阐明上述问题同时，本人尽可能举些实验中的问题案例予以说明。一、克隆基因的酶切位点问题 1、克隆位点选择的问题。首先要对目标基因进行酶切位点扫描分析，列出其所含酶切位点清单。然后对照质粒多克隆位点，所选择的克隆位点必须是目标基因所不含的酶切位点。2、保护碱基数目的问题。在设计PCR引物时，引入酶切位点后，常常要加入保护碱基，但是保护碱基数量多少，可能被新手所忽视。这种忽视碰可能会大大影响后续的实验进展。

3.质粒构建的引物是什么

如果是需要把一个特定的基因片段扩增后，插入到载体上构建质粒，则要根据载体上多克隆位点带有的酶切位点，在自己的目标基因片段上下游都分别设计一段序列，并在设计的序列中引入载体上的酶切位点。用于完成PCR扩增，并能够在目标序列上下游都引入酶切位点的两段序列就叫做质粒构建引物。

4.很想知道质粒构建的详细步骤？

质粒是现代分子生物学中常用的载体之一，质粒构建，就是指把特定的基因序列插入到工程质粒中。但仅仅插入质粒是不够的，还需要把质粒转化到细菌、细胞或酵母中，使质粒在其中扩展或表达。以细菌为例，转化后的细菌还需涂布到平板，使之分散为单个细菌，单个细菌长成菌落。

5.克隆和质粒构建是做什么的

质粒是现代分子生物学中常用的载体之一，质粒构建，就是指把特定的基因序列插入到工程质粒中。但仅仅插入质粒是不够的，还需要把质粒转化到细菌、细胞或酵母中，使质粒在其中扩展或表达。以细菌为例，转化后的细菌还需涂布到平板，使之分散为单个细菌，在合适的条件下培养，单个细菌长成菌落，这时，这个菌落的所有的菌都是有一个细菌分裂而来，其状态和携带的质粒是一致的，就俗称一个“克隆”，用于后续实验。从无性繁殖的角度来讲，上述的“克隆”和克隆羊的“克隆”概念是一致的。

6.质粒是如何构建的？

因为高拷贝质粒稳定性低，低拷贝数的质粒DNA在宿主细胞分裂前只能复制1～2次，而多拷贝数质粒可以在细胞分裂前复制成10～200拷贝。高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid)，独立于细菌细胞而自主复制；低拷贝数的质粒一般是严紧型质粒(stringent plasmid)，它们的复制随细菌染色体的复制同步进行。外源基因的表达量随拷贝数的增加而提高，拷贝数与发酵目标产物产率的这种关系却不存在。高拷贝数时外源基因的表达量不再由质粒的拷贝数决定，高拷贝数的质粒往往很不稳定。由于质粒拷贝数的变化直接与基因目标产物的产率有关，质粒的拷贝数是一个非常重要的参数。而且同一个细胞里一般不会同时有两种不同的质粒，这是质粒不相容性(plasmid incompatibility)。在细菌细胞增殖过程中。

7.质粒构建及表达有什么意义及价值

可以根据您的需要创造新的基因（质粒构建），表达后可拥有新的蛋白质，即通常说的重组蛋白或融合蛋白（质粒表达）。加入蛋白质ABC和DEFG分别由三个结构域和四个结构域组成，而你需要分子量小且具有第一个蛋白A结构域的功能和第二个蛋白中G结构域的功能。