m13引物:通用引物和特异性引物的区别

1.通用引物和特异性引物的区别

通用引物，含义为克隆位点两旁的序列匹配，目的是引扩出DNA片段，而序列特异性引物指一种测定基因突变的方法。通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配，这样不管载体插入什么DNA片段，都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序，序列特异性引物利用针对点突变的2个等位特异性寡核苷酸(ASO)引物(A、B标记其中之一)与另一共同引物（C）组成引物系统。在引物延伸时；A与B同时竞争靶序列上同一复性位点，胶片上的显带是标记同位素的引物所扩增的产物，用于SYBR Green I法时的一对引物与一般PCR的引物,在引物设计上所要求的参数是不同的,引物设计的要求。端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C;5、正向引物与探针离得越近越好。6、PCR扩增产物长度。引物的产物大小不要太大：7、引物的退火温度要高。要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在；而且引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力。即引物应该跨外显子，最好是引物能跨外显子的接头区。

2.通用测序引物的问题，急！谢谢！

M13-(即M13(-48)),这些什么 (-47)(-48)(-20) 是表示每种的序列不同看您需要什么的 序列了我是北京三博远志测序公司的测序员给你看些序列M13(-96)5'-CCC TCA TAG TTA GCG TAA CG-3'M13F5'M13F（-47）5'M13R（-48）5'

3.pGEM easy-T载体上用的M13引物序列是什么？

能否详细描述一下两条带的位置，cDNA？因为一般情况下引物二聚体的条带都是或多或少的存在的。那么可能是引物出现了错配，回收测序即可。用的DNA基因组 回答：基因组DNA的话有杂带几乎不可避免，因为错配可能很大。

4.用m13通用引物扩增blunt载体得到多条pcr产物，怎么办

能否详细描述一下两条带的位置，另外你以什么作为template？cDNA？ 因为一般情况下引物二聚体的条带都是或多或少的存在的。 如果是目的条带有两条，那么可能是引物出现了错配，也有可能是本身就有两种可能。回收测序即可。 两条带距离很近，一条很亮一条很暗，用的DNA基因组 回答： 基因组DNA的话有杂带几乎不可避免，因为错配可能很大，挺正常的。 如果两条带距离很近、又基本符合你目的片段的大小的话，可以继续跑胶让它们分开一些，然后切胶回收，连接T载体，转化涂板，挑菌测序。挑对的就行了。

5.用m13引物pcr扩增克隆载体，产生多个条带，能够测序吗

能否详细描述一下两条带的位置，另外你以什么作为template？cDNA？因为一般情况下引物二聚体的条带都是或多或少的存在的。如果是目的条带有两条，那么可能是引物出现了错配，也有可能是本身就有两种可能。回收测序即可。两条带距离很近，用的DNA基因组 回答：基因组DNA的话有杂带几乎不可避免，因为错配可能很大，挺正常的。

6.哪些载体可以使用M13通用引物测序？ 必须是M13噬菌体载体吗？

根据你的质粒载体序列。

7.什么叫通用引物？都有哪些，如何选择？谢谢！

通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配，或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DNA片段，都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序，通用”也不是万能的.上海生工可以免费提供的引物，M13+(即M13(-47))：pGEX5’/,3’AOX;α-factor,-96gIII,pBV220+/,pEGFP-N5’/,3’;pCMV5-F/,R;5’/,3’AD;pGL3+/,-;R;CMV,U6promoter,S-Tag,