引物浓度:干粉引物怎么稀释到工作液 时间:2022-03-14 15:03:13 由作文陶老师原创 分享 复制全文 下载本文 作文陶老师原创2022-03-14 15:03:13 复制全文 下载全文 目录1.干粉引物怎么稀释到工作液2.请问PCR引物浓度是如何设定的?3.PCR引物浓度一般选多少4.引物30umol/l,怎么算加入的体积5.PCR中引物终浓度是多少6.PCR引物浓度一般选多少7.引物浓度单位pm是什么意思1.干粉引物怎么稀释到工作液然后加入适量的水或TE溶解。一般配制成较高浓度的母液(约100μM),使用前取出其中一部分用ddH2O配制成10μM或20μM的工作液。引物浓度不宜偏高,浓度过高有两个弊端:一是容易形成引物二聚体(primer-dimer),二是当扩增微量靶序列并且起始材料又比较粗时,容易产生非特异性产物。用低浓度引物不仅经济,而且反应特异性也较好。一般终浓度用0.25-0.5pM/1 引物的分子量如何计算?AAGCTTTTACCGC的分子量是多少?1个OD值是不是等于40UG。质量数的含义是什么,4摩尔数(μmol)和终浓度(pM)和稀释水量(μl)是不是计算稀释引物都要用到以上四点的各个参数?合成引物的单子上应该有算法:1OD=33ug1个碱基的分子量=324.5(以上为近似值,通常都这样用)1条引物的分子量=碱基数*324.5质量数=OD*33ug摩尔数=质量数/分子量先离心的原因是什么?因为引物合成后是干粉状的,在运输过程中可能会沾到管壁或管盖上,直接打开有些粉末可能会飘出去,引物的量就减少了。2.请问PCR引物浓度是如何设定的?一般都稀释成应用液,常用浓度是10uM/L也就是10pM/L.这样的话,至于引物会不会降解的问题,估计高浓度比低浓度保存时间长说法是对的。通常引物在20度放半年都没有问题,其余都放-80度保存,引物稀释很简单,一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nM,3.PCR引物浓度一般选多少PCR引物浓度一般选5~20μmol/L。PCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即:引物(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。引物有多种设计方法,由PCR在实验中的目的决定,PCR所用的酶主要有两种来源:Taq和Pfu,模板即扩增用的DNA,缓冲液的成分最为复杂,但在特殊情况下也可使用铵根离子;扩展资料PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,以便它与引物结合,②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;4.引物30umol/l,怎么算加入的体积一般来说每条引物浓度在0.1-0.5微摩尔每升。5.PCR中引物终浓度是多少一般来说每条引物浓度在0.1-0.5微摩尔每升,就可以满足30个循环的反应。更具体信息的你可以参考使用PCR酶系统说明书,有的会提供推荐的最佳体系组成浓度。6.PCR引物浓度一般选多少一般母液浓度是100uM,使用时稀释成10uM。工作浓度不固定。7.引物浓度单位pm是什么意思为了确定引物浓度,可以在260nm(OD260)测量光密度值。然后使用光吸收值和微摩消光系数的倒数(nmol/OD),通过Beers法则计算引物浓度。 复制全文下载全文 复制全文下载全文