ctab法提取dna:CTAB法提取DNA中各试剂的用途

1.CTAB法提取DNA中各试剂的用途

是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

2.用CTAB法提取细菌DNA的过程

一、针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂：抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water（抑制RNA酶活性）3MNaAc(pH5.2)96%乙醇70%乙醇试验步骤：1、抽提缓冲液65℃预热。2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，3、加酚/异戊醇（24：5、重复再作一次步骤4。10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C下沉淀。以70％乙醇条洗沉淀，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml 水中。二、较为常用的细菌DNA提取方法：1、将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。3、沉淀中加入567ul 的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，于37℃温育1h.4、加入100ul5mol/LNaCl 充分混匀，再加入80ulCTAB/混匀后再65℃温育10min。

3.SDS法和CTAB法提取基因组DNA一般分别用于哪种样本？

CTAB 是阳离子去污剂,可以很好是去除多糖,一般提取植物组织需要用CTAB法,

4.用CTAB法提取DNA时，怎样有效去除沉淀中的糖，多酚中的杂质

CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

5.CTAB法提取的DNA应该是不同长度的，为什么

原理是一致的.方法不同. 1植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子. 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,水浴锅,50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒. 三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ：1.5% SDS. 2、提取缓冲液Ⅱ：加水至300ml. 3、80:氯仿:戊醇:液氮、异丙醇、TE缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ,60℃水浴预热. 2.幼苗或叶子5-10g,在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中,剧烈摇动混匀,60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高),不时摇动. 3.加入20ml氯仿/乙醇溶液,颠倒混匀(需带手套,使水相和有机相分层(必要时可重新混匀). 4.室温下5000rpm离心5分钟. 5.仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀. 6.在1.5ml eppendorf中加入1ml TE.用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE. 7.如DNA不形成絮状沉淀,再将沉淀移入TE管中.这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上,以帮助溶解. 8.将DNA溶液3000rpm离心5分钟,上清液倒入干净的5ml离心管. 9.加入5μl RNaseA(10μg/

6.CTAB法提DNA怎么配试剂？

浓度都写了，百度也会有详细用量。倍体积就是说你目前的溶液体积如果是500微升。

7.DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些

提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。一）CTAB法CTAB是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。（二）SDS法利用高浓度的SDS，在较高温度（55—65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的做法使蛋白质及多糖杂质沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保温，在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。以下是在提取热带水果DNA时设计的两种不同方法步骤，对比起来CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！1、 CTAB法1） 在所需量的CTAB抽提液中加入2－巯基乙醇，使终浓度达2％（v/v）。将此溶液预热至65℃。对于每克新鲜的叶组织大约需要4ml的2－ME/CTAB抽提液。2） 用液氮（－196℃）或干冰（－78℃）冷却粉碎器/将0.5 g植物组织粉碎成细粉，然后将组织转移到2.0 ml离心管。CTAB，混合使之充分湿润，不时颠倒混匀。4） 待冷至室温后，颠倒混匀至溶液呈乳浊状----但不要振荡。l）转移至另一干净的离心管中，l）转移至另一干净的1.5 ml离心管中，加入600 µ颠倒混匀，室温或-20℃放置20 min。加1 ml70%乙醇洗涤沉淀两次。（25℃，离心10 min）10）凉干DNA，2、 SDS法① 将0.3 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。② 加入1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液（其中加入3 μl β—巯基乙醇，增加DNA的稳定性），置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。③ 加入0.45 ml 5M的醋酸钾。混匀，冰浴20分钟，需要的话。Miracloth纱布过滤除去沉淀，上清液转入另一离心管中，加5 μl RNaseA贮液，⑥ 加入等体积氯仿。